美洲大赤魷(DosidicusGigas)在(zai)食(shi)品(pin)加工(gong)過(guo)(guo)程中(zhong)的(de)(de)(de)(de)軟骨廢棄物為(wei)(wei)原料,建立包括粉碎、脫(tuo)水(shui)脫(tuo)脂(zhi)、酶解(jie)、除蛋白(bai)、醇沉(chen)、離子(zi)交換(huan)、脫(tuo)鹽等操作(zuo)流程的(de)(de)(de)(de)CS制(zhi)備方法,制(zhi)備得(de)到新型(xing)CS。最(zui)終產(chan)品(pin)的(de)(de)(de)(de)產(chan)率達(da)到16±2%。用(yong)商品(pin)化(hua)的(de)(de)(de)(de)硫(liu)(liu)酸軟骨素ABC酶、硫(liu)(liu)酸皮膚素酶、透明質酸酶(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以(yi)(yi)及(ji)實驗(yan)室自有產(chan)權的(de)(de)(de)(de)rHCLase降(jiang)解(jie)所(suo)得(de)多(duo)糖(tang)(tang)(tang),根據(ju)酶的(de)(de)(de)(de)底物專一性(xing),確(que)認所(suo)制(zhi)備的(de)(de)(de)(de)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)為(wei)(wei)CS;通(tong)過(guo)(guo)咔唑反應(ying)檢(jian)測(ce)樣品(pin)中(zhong)新型(xing)CS含量,BCA蛋白(bai)定(ding)量法檢(jian)測(ce)樣品(pin)中(zhong)蛋白(bai)含量。結(jie)(jie)果提示(shi):樣品(pin)中(zhong)新型(xing)CS含量達(da)到97%以(yi)(yi)上(shang),蛋白(bai)含量低于2%。2.新型(xing)CS多(duo)糖(tang)(tang)(tang)結(jie)(jie)構(gou)的(de)(de)(de)(de)初步分(fen)析(xi):參照葡(pu)聚糖(tang)(tang)(tang)分(fen)子(zi)量標準物,經凝(ning)膠過(guo)(guo)濾HPLC分(fen)析(xi),確(que)定(ding)所(suo)制(zhi)備的(de)(de)(de)(de)NER-CS多(duo)糖(tang)(tang)(tang)平均分(fen)子(zi)量約為(wei)(wei)623.2 kDa。再通(tong)過(guo)(guo)硫(liu)(liu)酸軟骨素ABC酶完全降(jiang)解(jie),結(jie)(jie)合HPLC分(fen)析(xi)二糖(tang)(tang)(tang)組成,發現NER-CS主要含有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)E-unit含量最(zui)高可達(da)44.5%,同時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含量分(fen)別(bie)為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)(liu)酸化(hua)度為(wei)(wei)1.37。是一種(zhong)新型(xing)高硫(liu)(liu)酸化(hua)CS。3NER-CS生(sheng)物活(huo)(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)初步分(fen)析(xi):1)用(yong)Aglyco試(shi)(shi)劑盒(he)檢(jian)測(ce)NER-CS的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)凝(ning)血活(huo)(huo)性(xing),結(jie)(jie)果顯示(shi):NER-CS抗(kang)(kang)FⅡa和(he)抗(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)分(fen)別(bie)為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)0.9±0.2U/mg,是陽性(xing)對照肝素抗(kang)(kang)FⅡa活(huo)(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)10%左(zuo)右,抗(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)4%左(zuo)右;2)利用(yong)乳腺癌(ai)4T1細(xi)胞試(shi)(shi)驗(yan)轉移模型(xing),分(fen)析(xi)NER-CS在(zai)小鼠(shu)體內抗(kang)(kang)腫瘤(liu)轉移活(huo)(huo)性(xing),結(jie)(jie)果顯示(shi):50、100和(he)200μgNER-CS的(de)(de)(de)(de)抑(yi)瘤(liu)率分(fen)別(bie)為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同時陽性(xing)對照100μg肝素的(de)(de)(de)(de)抑(yi)瘤(liu)率為(wei)(wei)74.6±1.8%;3)用(yong)親和(he)素修(xiu)飾的(de)(de)(de)(de)CM5芯片固定(ding)生(sheng)物素化(hua)NER-CS,分(fen)析(xi)NER-CS與(yu)(yu)五種(zhong)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)、三種(zhong)選擇素的(de)(de)(de)(de)相互作(zuo)用(yong)活(huo)(huo)性(xing),結(jie)(jie)果顯示(shi)NER-CS與(yu)(yu)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)HGF、bFGF相互作(zuo)用(yong)活(huo)(huo)性(xing)較高,親和(he)力(li)常數分(fen)別(bie)為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)備及(ji)其抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)(huo)性(xing)分(fen)析(xi)。