沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)是一(yi)種常見的(de)(de)食(shi)源性(xing)致病菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)鑒定的(de)(de)傳統(tong)方法主要是根據(ju)形態學特征(zheng)、培養特征(zheng)、生(sheng)理生(sheng)化特征(zheng)、抗(kang)原特征(zheng)、噬(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)體特征(zheng)等。1885年沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)等在霍亂流行時(shi)分離到(dao)豬霍亂沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),故(gu)定名為沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)屬(shu)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)屬(shu)有的(de)(de)專對人(ren)(ren)類(lei)致病,有的(de)(de)只對動物致病,也(ye)有對人(ren)(ren)和動物都致病。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)病是指由各種類(lei)型沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)所引起的(de)(de)對人(ren)(ren)類(lei)、家畜以(yi)(yi)及野生(sheng)禽(qin)獸不同形式的(de)(de)總(zong)稱。感染沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)人(ren)(ren)或帶菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)者的(de)(de)糞便(bian)污染食(shi)品,可使(shi)人(ren)(ren)發生(sheng)食(shi)物中毒。據(ju)統(tong)計在世界各國(guo)的(de)(de)種類(lei)細菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)食(shi)物中毒中,沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)引起的(de)(de)食(shi)物中毒常列榜(bang)首(shou)。我國(guo)內陸(lu)地區也(ye)以(yi)(yi)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)為首(shou)位。
沙門氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)病的病原(yuan)(yuan)體。屬腸桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)科,革蘭氏(shi)陰性腸道桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)。已發現的近一千(qian)種(zhong)(或菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)株)。按(an)其抗原(yuan)(yuan)成分,可分為甲、乙(yi)、丙、丁、戊等(deng)基本菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)組(zu)。其中(zhong)與人體疾病有(you)關的主要有(you)甲組(zu)的副傷(shang)(shang)寒(han)甲桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),乙(yi)組(zu)的副傷(shang)(shang)寒(han)乙(yi)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)鼠傷(shang)(shang)寒(han)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丙組(zu)的副傷(shang)(shang)寒(han)丙桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)豬霍亂桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丁組(zu)的傷(shang)(shang)寒(han)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)腸炎桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)等(deng)。除傷(shang)(shang)寒(han)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)、副傷(shang)(shang)寒(han)甲桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)副傷(shang)(shang)寒(han)乙(yi)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)引起(qi)人類(lei)的疾病外,大多數僅(jin)能引起(qi)家畜、鼠類(lei)和(he)(he)禽類(lei)等(deng)動物(wu)的疾病,但有(you)時也(ye)可污染人類(lei)的食(shi)物(wu)而(er)引起(qi)食(shi)物(wu)中(zhong)毒。
沙門(men)氏(shi)菌在(zai)水中(zhong)不易(yi)繁(fan)殖,但可(ke)生(sheng)存(cun)2-3周,冰箱中(zhong)可(ke)生(sheng)存(cun)3-4個月,在(zai)自然(ran)環境的糞便中(zhong)可(ke)存(cun)活1-2個月。沙門(men)氏(shi)菌最適繁(fan)殖溫(wen)度為37℃,在(zai)20℃以上即能大量繁(fan)殖,因此,低溫(wen)儲存(cun)食品是一項(xiang)重(zhong)要預防(fang)措施。
菌(jun)體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢(jia)膜(mo),除雞(ji)白(bai)痢沙門氏菌(jun)和雞(ji)傷寒沙門氏菌(jun)外,大多有(you)(you)周身鞭(bian)毛。營養要求(qiu)不(bu)(bu)(bu)高,分離培養常采用腸道選擇鑒別(bie)培養基。生化反(fan)應對本屬菌(jun)的(de)(de)鑒別(bie)具(ju)有(you)(you)重要參考意(yi)義(見(jian)表)。不(bu)(bu)(bu)液化明(ming)膠,不(bu)(bu)(bu)分解尿(niao)素,不(bu)(bu)(bu)產(chan)(chan)生吲哚,不(bu)(bu)(bu)發(fa)酵(jiao)乳(ru)糖(tang)(tang)和蔗糖(tang)(tang),能發(fa)酵(jiao)葡萄(tao)糖(tang)(tang)、甘(gan)露醇(chun)、麥芽糖(tang)(tang)和衛芽糖(tang)(tang),大多產(chan)(chan)酸產(chan)(chan)氣(qi),少(shao)數只產(chan)(chan)酸不(bu)(bu)(bu)產(chan)(chan)氣(qi)。VP試(shi)驗(yan)陰性,有(you)(you)賴氨酸脫羧酶(mei)。DNA的(de)(de)G+C含量為50~53%。對熱抵(di)抗力不(bu)(bu)(bu)強(qiang),在(zai)60℃15分鐘可被殺死。在(zai)水中存活2~3周。在(zai)5%的(de)(de)石炭酸中,5分鐘死亡。
本屬(shu)菌(jun)(jun)按生化反(fan)應分為(wei)4個亞屬(shu)。亞屬(shu)Ⅰ是生化反(fan)應典型(xing)的和最常見的沙(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun);亞屬(shu)Ⅱ和Ⅳ是生化反(fan)應不典型(xing)的沙(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun);亞屬(shu)Ⅲ是亞利桑(sang)那沙(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)。
沙門(men)氏菌具(ju)有復雜(za)的抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)結構,一般可分為菌體(O)抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)、鞭(bian)毛(mao)(H)抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)和表面(Vi)抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)3種。
生化反應很活潑,能分解多種(zhong)糖類和醇。
1)需氧及兼性厭氧菌。
2)在(zai)普通瓊脂培養基(ji)上生長良好(hao),培養24h后,形成(cheng)中等(deng)大小、圓形、表面光(guang)滑、無色半(ban)透明(ming)、邊(bian)緣(yuan)整齊的菌落,其(qi)菌落特征亦與(yu)大腸(chang)桿菌相似(無糞臭(chou)味)。
3)鑒別培(pei)養基(麥康凱(kai)、SS、伊紅美(mei)藍):一般無色菌(jun)落(luo)。
4)三(san)糖鐵瓊脂斜面:斜面為紅色,底部變黑并產氣。
1)發酵(jiao)葡萄糖(tang),麥芽(ya)糖(tang),甘露(lu)醇和(he)山梨醇產氣;
2)不發酵乳糖、蔗糖和側金盞花醇;
3)不產(chan)吲(yin)哚、V-P反應陰性(xing);
4)不水(shui)解尿素和對苯丙氨酸不脫氨。
傷(shang)寒沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)、雞傷(shang)寒沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)及一(yi)部分雞白痢(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)發酵糖不產(chan)氣(qi),大多數(shu)雞白痢(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)不發酵麥(mai)芽糖;除雞白痢(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)、豬傷(shang)寒沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)、甲型副傷(shang)寒沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)、傷(shang)寒沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)和(he)仙臺沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)等外,均能(neng)利用枸(gou)櫞酸(suan)鹽。
沙門氏(shi)菌具有復(fu)雜的抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)結構,一(yi)般沙門氏(shi)菌具有菌體(O)抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)、鞭毛(H)抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)和表面抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(莢膜(mo)或包膜(mo)抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan))三種抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)。
肉及其(qi)制(zhi)品的(de)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率(lv)(lv)美國為(wei)20%-25%、英國為(wei)9.9%、日本檢查進口家禽(qin)的(de)污染率(lv)(lv)為(wei)10.3%,國內(nei)肉類(lei)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率(lv)(lv)在1.1%-39.5%。
中國蛋及其制(zhi)品沙(sha)門氏菌檢出(chu)率為3.9%-43.7%,由(you)于吃蛋引起鼠傷寒病的(de)(de)病例報告逐(zhu)漸有增加的(de)(de)趨勢。
食(shi)品在加工、運輸(shu)、出售過(guo)程中(zhong)往往被沙門氏菌污染(ran)。沙門氏菌在糞便、土壤、食(shi)品、水中(zhong)可生存5個(ge)月(yue)至2年之久。
恢(hui)復期患者(zhe)和無癥狀(zhuang)的(de)帶(dai)菌者(zhe)也是常(chang)見的(de)傳染源。
廣泛(fan)分(fen)(fen)布(bu)于自然界,常常寄居在人和(he)(he)動物(wu)(wu)體內,特(te)別是家禽、家畜(chu)及(ji)寵物(wu)(wu)的腸道中(zhong)。主要(yao)污染(ran)的食品(pin)有(you):肉(rou)(rou)和(he)(he)肉(rou)(rou)制(zhi)品(pin)、蛋和(he)(he)蛋制(zhi)品(pin)、奶和(he)(he)奶制(zhi)品(pin)等。由于沙(sha)門氏菌不分(fen)(fen)解蛋白質,食物(wu)(wu)被其污染(ran)后表面看(kan)起來似乎并沒有(you)變化.
沙門(men)氏菌感(gan)染癥為人畜共(gong)患感(gan)染性(xing)疾病(bing),主要由食(shi)用遭(zao)受污染的食(shi)物導致,是許(xu)多國(guo)家食(shi)物中毒的重要病(bing)源。
典型癥狀包(bao)括發(fa)熱(re)、惡心、嘔吐、腹瀉(xie)及腹部絞痛等癥狀,通常在發(fa)熱(re)后72小時(shi)內會好轉(zhuan)。嬰兒(er)、老(lao)年人、免疫功(gong)能低下(xia)的患者(zhe)則可(ke)能因沙門氏菌(jun)進入血液而出現嚴重(zhong)且危及生命的菌(jun)血癥,少數還會合并(bing)腦(nao)膜炎或骨髓炎。
一(yi)般沙(sha)門氏(shi)菌(jun)造成的(de)腸胃(wei)炎不需(xu)要給予抗生(sheng)素治(zhi)療(liao);而(er)以補充水分與(yu)電解質為主;但對于新(xin)生(sheng)兒、免疫(yi)功能低下(xia)患者(zhe)及特殊傷員;則需(xu)要視(shi)情況紿予抗生(sheng)素治(zhi)療(liao)。
1、餐(can)前(qian)、便后(hou)、接(jie)觸食物前(qian)、接(jie)觸動物或生蛋后(hou)應仔細洗凈雙手。
2、處理(li)生食和熟食的砧板(ban)要(yao)分開。
3、食物要熟透再(zai)吃(尤其是雞(ji)蛋與家禽類(lei))。
4、非現(xian)做(zuo)現(xian)吃的食物應(ying)(ying)以(yi)保(bao)鮮膜包覆后放進(jin)冰箱保(bao)存(cun),再次食用前應(ying)(ying)加(jia)熱或煮(zhu)熟。
5、撲滅并阻隔蒼(cang)蠅(ying)等病媒。被蒼(cang)蠅(ying)沾染、過期或腐敗的不(bu)潔食物均應(ying)丟棄,切勿食用(yong)。
6、水塔應(ying)經常清洗、消毒。
7、旅(lv)行(xing)或野營時的飲用水應(ying)煮沸并消毒。
8、如有嘔(ou)吐(tu)、腹瀉或發熱等癥狀,應盡快(kuai)就醫。
沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)是美國(guo)(guo)食(shi)(shi)物中毒(du)致死(si)的主要原因(yin)。美國(guo)(guo)人(ren)對這(zhe)(zhe)種病菌(jun)(jun)(jun)一點都(dou)不(bu)陌生(sheng)(sheng),每年(nian)(nian)全(quan)國(guo)(guo)大約報告40000例沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)病例。但(dan)實際的感染(ran)(ran)人(ren)數可能要達20倍以(yi)上(shang),因(yin)為許多輕型病人(ren)可能未確診,據(ju)不(bu)完全(quan)統計(ji),每年(nian)(nian)大約有(you)1000人(ren)死(si)于(yu)急性沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)。但(dan)是,以(yi)前各州爆發(fa)的疫(yi)情(qing)幾乎(hu)都(dou)與(yu)人(ren)們吃(chi)(chi)了(le)染(ran)(ran)上(shang)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)的肉類(lei)(lei)、蛋(dan)類(lei)(lei)、乳類(lei)(lei)有(you)關,但(dan)迄今為止,很(hen)少(shao)聽說吃(chi)(chi)蔬果大面積受沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)甚至在(zai)人(ren)群中引(yin)發(fa)大疫(yi)情(qing)的。對此,周(zhou)福生(sheng)(sheng)教授解釋說,這(zhe)(zhe)可能是西(xi)紅柿(shi)在(zai)生(sheng)(sheng)長(chang)的過程(cheng)(cheng)中,由于(yu)空氣(qi)中紫外線不(bu)夠強(qiang)烈,植物在(zai)灌溉過程(cheng)(cheng)或因(yin)土壤中含有(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),這(zhe)(zhe)樣才使西(xi)紅柿(shi)的表皮(pi)上(shang)沾染(ran)(ran)了(le)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),加上(shang)不(bu)少(shao)人(ren)有(you)生(sheng)(sheng)食(shi)(shi)西(xi)紅柿(shi)的習慣(guan),如果沒(mei)有(you)清洗干(gan)凈,就(jiu)(jiu)(jiu)完全(quan)有(you)可能發(fa)生(sheng)(sheng)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)。不(bu)光是食(shi)(shi)用西(xi)紅柿(shi),其(qi)(qi)他瓜果蔬菜也一樣。沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)主要污(wu)染(ran)(ran)肉類(lei)(lei)食(shi)(shi)品(pin),魚、禽、奶、蛋(dan)類(lei)(lei)食(shi)(shi)品(pin)也可受此菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)(shi)物中毒(du)全(quan)年(nian)(nian)都(dou)可發(fa)生(sheng)(sheng),吃(chi)(chi)了(le)未煮透的病、死(si)牲畜肉或在(zai)屠宰后其(qi)(qi)他環節(jie)污(wu)染(ran)(ran)的牲畜肉是引(yin)起沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)(shi)物中毒(du)的最主要原因(yin)。有(you)食(shi)(shi)品(pin)專家指出美國(guo)(guo)人(ren)吃(chi)(chi)雞(ji)(ji)(ji)蛋(dan)的習慣(guan)與(yu)國(guo)(guo)人(ren)不(bu)同(tong),他們喜歡吃(chi)(chi)半熟的雞(ji)(ji)(ji)蛋(dan)甚至是生(sheng)(sheng)雞(ji)(ji)(ji)蛋(dan),所以(yi)一旦(dan)雞(ji)(ji)(ji)蛋(dan)里含有(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),感染(ran)(ran)的幾率就(jiu)(jiu)(jiu)比較(jiao)高。“在(zai)國(guo)(guo)內,生(sheng)(sheng)雞(ji)(ji)(ji)蛋(dan)里含有(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)其(qi)(qi)實并不(bu)奇怪,只不(bu)過國(guo)(guo)人(ren)喜歡將雞(ji)(ji)(ji)蛋(dan)煮熟吃(chi)(chi),這(zhe)(zhe)樣就(jiu)(jiu)(jiu)大大減(jian)少(shao)了(le)感染(ran)(ran)的幾率。”
由(you)沙門氏菌引(yin)起的(de)(de)食(shi)品(pin)中毒(du)癥(zheng)狀主要有惡心、嘔吐、腹(fu)痛、頭痛、畏(wei)寒和腹(fu)瀉等,還(huan)伴有乏力(li)、肌(ji)肉酸痛、視覺模糊、中等程度(du)發熱、躁動不安和嗜睡,延續時間2~3d,平均(jun)致死率為4.1%。其主要原因是由(you)于攝入(ru)了含(han)有大量(liang)沙門氏菌屬的(de)(de)非寄主專一性菌種(zhong)或血(xue)清型(xing)的(de)(de)食(shi)品(pin)所引(yin)起的(de)(de)。在(zai)攝入(ru)含(han)毒(du)食(shi)品(pin)之后.癥(zheng)狀一般(ban)在(zai)12~14h內出現(xian),有些(xie)潛伏期較長(chang)。
防止沙(sha)門氏菌污(wu)染食(shi)品;控制食(shi)品中沙(sha)門氏菌的(de)繁殖;加熱(re)以徹底殺滅病原(yuan)菌。
沙門(men)氏(shi)菌不耐高溫(wen)(wen),食物的(de)中心溫(wen)(wen)度達70℃以上(shang),持續5分鐘一般都(dou)可(ke)以殺死(si)包括沙門(men)氏(shi)菌等(deng)常見(jian)食源性致病(bing)菌。家(jia)庭(ting)中一般的(de)熱處理烹調(diao)方式都(dou)可(ke)有效殺滅(mie)該菌。
稱取25g(mL)樣(yang)(yang)品(pin)放(fang)入盛有225 mL BPW的(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)杯中,以8000 r/min~10 000 r/min均(jun)質(zhi)(zhi)1min~2min,或(huo)(huo)置于盛有225 mL BPW的(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)袋中,用(yong)拍(pai)擊式均(jun)質(zhi)(zhi)器拍(pai)打1min~2min。若樣(yang)(yang)品(pin)為液(ye)態,不(bu)需要均(jun)質(zhi)(zhi),振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)。如(ru)需測定pH值,用(yong)1mol/mL無(wu)(wu)菌(jun)(jun)NaOH或(huo)(huo)HCl調pH至6.8±0.2。無(wu)(wu)菌(jun)(jun)操作將樣(yang)(yang)品(pin)轉至500mL錐形瓶中,如(ru)使用(yong)均(jun)質(zhi)(zhi)袋,可直接進行培養(yang),于36 ℃±1℃培養(yang)8h~18h。
如(ru)為冷(leng)凍產品(pin),應(ying)在45℃以下(xia)不超(chao)過(guo)15min,或2℃~5℃不超(chao)過(guo)18h解(jie)凍。
輕輕搖動(dong)培養(yang)(yang)過的樣品混(hun)合物(wu),移取1mL,轉種于(yu)10mL TTB內,于(yu)42℃±1℃培養(yang)(yang)18h~24h。同時,另取1mL,轉種于(yu)10 mL SC內,于(yu)36℃±1℃培養(yang)(yang)18h~24h。
分別用接種環取增菌(jun)液1環,劃線接種于一(yi)(yi)個(ge)(ge)BS瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)和一(yi)(yi)個(ge)(ge)XLD瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(或HE瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)或沙(sha)門氏菌(jun)屬顯色培(pei)養(yang)基平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban))。于36℃±1℃分別培(pei)養(yang)18h~24h(XLD瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)、HE瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)、沙(sha)門氏菌(jun)屬顯色培(pei)養(yang)基平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban))或40h~48h (BS瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)),觀察(cha)各(ge)個(ge)(ge)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)上(shang)生長的(de)(de)菌(jun)落,各(ge)個(ge)(ge)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)上(shang)的(de)(de)菌(jun)落特征見表1。
表 1 沙(sha)門氏菌(jun)屬在(zai)不同選(xuan)擇(ze)性瓊脂平板上的菌(jun)落特征(zheng)
選擇性瓊(qiong)脂平板 沙門氏菌
BS 瓊(qiong)脂 菌(jun)(jun)落為黑色(se)有金屬光(guang)澤(ze)、棕褐(he)色(se)或灰色(se),菌(jun)(jun)落周圍培(pei)養(yang)基(ji)可呈(cheng)黑色(se)或棕色(se);有些菌(jun)(jun)株形(xing)成(cheng)灰綠色(se)的菌(jun)(jun)落,周圍培(pei)養(yang)基(ji)不(bu)變。
HE 瓊(qiong)脂 藍(lan)綠色或藍(lan)色,多(duo)數菌落中心(xin)(xin)黑色或幾乎全黑色;有些菌株為黃(huang)色,中心(xin)(xin)黑色或幾乎全黑色。
XLD 瓊脂 菌落(luo)呈粉紅(hong)色(se)(se),帶或(huo)不帶黑色(se)(se)中心,有(you)些(xie)菌株可呈現(xian)大的帶光(guang)澤(ze)的黑色(se)(se)中心,或(huo)呈現(xian)全部黑色(se)(se)的菌落(luo);有(you)些(xie)菌株為黃色(se)(se)菌落(luo),帶或(huo)不帶黑色(se)(se)中心。
沙門(men)氏菌屬顯(xian)色培養(yang) 按(an)照顯(xian)色培養(yang)基的說明進行判定。
自(zi)19世(shi)紀(ji)后期,沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)首(shou)次被(bei)鑒定為人類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)病(bing)(bing)(bing)(bing)原(yuan)以來(lai),檢測(ce)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)學都是(shi)(shi)建立(li)在采取感(gan)染病(bing)(bing)(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便(bian)或血(xue)液作為臨(lin)床病(bing)(bing)(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)基礎上(shang)。此后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年間,用于(yu)(yu)從(cong)食(shi)(shi)品中(zhong)分(fen)離沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)實質上(shang)與那些(xie)用于(yu)(yu)臨(lin)床病(bing)(bing)(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)是(shi)(shi)相同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但至少有三個因素限制了用于(yu)(yu)臨(lin)床病(bing)(bing)(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)應用在食(shi)(shi)品分(fen)析上(shang)。第(di)一(yi)(yi),通常(chang),沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)含量水平(ping)在污染食(shi)(shi)品中(zhong)比有感(gan)染病(bing)(bing)(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)料(liao)中(zhong)要低很(hen)多;第(di)二,食(shi)(shi)品本(ben)身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)性質會干擾病(bing)(bing)(bing)(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢測(ce),例(li)如,某些(xie)食(shi)(shi)品中(zhong)固有菌(jun)(jun)(jun)群(qun)可能處在一(yi)(yi)個很(hen)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)水平(ping),從(cong)而(er)影(ying)響(xiang)特(te)定細菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)選擇(ze)性分(fen)離和鑒定;第(di)三,與臨(lin)床病(bing)(bing)(bing)(bing)料(liao)不(bu)(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)(shi),經過加工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品,由于(yu)(yu)加熱、干燥、高含鹽量、酸和冷凍等(deng)因素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)作用,其(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)受到了尚不(bu)(bu)致(zhi)命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷(shang)(shang)(shang)或稱“致(zhi)傷(shang)(shang)(shang)”。這(zhe)就形成了一(yi)(yi)個具有不(bu)(bu)同生(sheng)長特(te)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)(jun)群(qun)。這(zhe)種(zhong)現象(xiang)對那些(xie)希望從(cong)食(shi)(shi)物(wu)(wu)樣品中(zhong)分(fen)離出(chu)沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品分(fen)析家來(lai)說有很(hen)大影(ying)響(xiang),因為在選擇(ze)培養基上(shang)直接培養“致(zhi)傷(shang)(shang)(shang)”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)通常(chang)是(shi)(shi)以細菌(jun)(jun)(jun)死亡和試驗(yan)失敗而(er)告(gao)終。為克服(fu)這(zhe)些(xie)困難,人們建立(li)了一(yi)(yi)種(zhong)簡(jian)單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生(sheng)物(wu)(wu)增殖步驟,專(zhuan)門針對以食(shi)(shi)品為傳播(bo)載(zai)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)原(yuan)。雖(sui)然這(zhe)些(xie)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)本(ben)身證明是(shi)(shi)可靠的(de)(de)(de)(de)(de)(de),但卻很(hen)費(fei)力、耗時,需(xu)要4~7天才能完(wan)成。因此,在需(xu)要及時、快(kuai)(kuai)速評價食(shi)(shi)品中(zhong)微生(sheng)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全性時,通常(chang)不(bu)(bu)被(bei)采用。隨著DNA和抗體技術的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)展,近10~15年間發(fa)展了無數改進的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa),其(qi)中(zhong)許多可以在48h內(nei)檢出(chu)沙(sha)(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun),這(zhe)些(xie)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)通稱為快(kuai)(kuai)速檢測(ce)。
利(li)用(yong)(yong)(yong)(yong)抗(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)體(ti)反應的(de)顯著特異性,來進行細菌(jun)(jun)的(de)鑒別和血清(qing)學定型,已有(you)半個多(duo)(duo)世紀(ji)的(de)歷(li)史(shi)。細菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)體(ti)或鞭毛(mao)抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)特異性抗(kang)(kang)體(ti)的(de)存(cun)在(zai),使得人(ren)們(men)可(ke)以(yi)(yi)建立(li)一些快(kuai)速方法來檢測以(yi)(yi)食品為(wei)載體(ti)的(de)病原(yuan)。已經建立(li)的(de)沙門氏菌(jun)(jun)免(mian)(mian)疫(yi)學檢測方法有(you)許多(duo)(duo)種(zhong)(zhong),大致可(ke)分(fen)(fen)為(wei)以(yi)(yi)酶標(biao)抗(kang)(kang)體(ti)(ELISA),熒(ying)光(guang)(guang)抗(kang)(kang)體(ti)染色(免(mian)(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)(guang)法),同位素(su)標(biao)記抗(kang)(kang)體(ti)(放射(she)免(mian)(mian)疫(yi)試驗(yan))為(wei)基(ji)礎的(de)方法及其(qi)它(ta)多(duo)(duo)種(zhong)(zhong)以(yi)(yi)抗(kang)(kang)體(ti)為(wei)基(ji)礎,利(li)用(yong)(yong)(yong)(yong)乳膠(jiao)凝集、免(mian)(mian)疫(yi)傳感器、免(mian)(mian)疫(yi)擴散及免(mian)(mian)疫(yi)色譜(pu)技術的(de)方法。但常規中最廣泛采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)的(de)是以(yi)(yi)雙位點ELISA技術即(ji)夾(jia)心(xin)ELISA為(wei)基(ji)礎的(de)方法。此法改進后用(yong)(yong)(yong)(yong)有(you)放射(she)活性的(de)同位素(su)替代標(biao)記抗(kang)(kang)體(ti),概括地說(shuo),是指以(yi)(yi)固定在(zai)固體(ti)基(ji)質(zhi)上的(de)“捕捉(zhuo)”抗(kang)(kang)體(ti)來捕捉(zhuo)目標(biao)抗(kang)(kang)原(yuan),經洗(xi)滌(di)除去(qu)未結合的(de)成分(fen)(fen),加(jia)入第二種(zhong)(zhong)酶標(biao)抗(kang)(kang)體(ti),此者結合在(zai)捕捉(zhuo)到(dao)的(de)抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)不同位點上,第二次洗(xi)滌(di)后加(jia)入酶作用(yong)(yong)(yong)(yong)基(ji)質(zhi),并(bing)令其(qi)與顏色成分(fen)(fen)反應,然后用(yong)(yong)(yong)(yong)分(fen)(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度法即(ji)很(hen)容易檢測到(dao)目標(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)。采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)微(wei)量滴(di)定板作為(wei)固態(tai)基(ji)質(zhi)使反應形式標(biao)準化,并(bing)促(cu)成其(qi)自動化。
黎(li)兆(zhao)(zhao)滾等(deng)人(ren)首次在國內(nei)口岸系(xi)統應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)微量板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對進(jin)(jin)(jin)出口動物產品(pin)(pin)(魚粉、肉(rou)(rou)骨粉等(deng))進(jin)(jin)(jin)行(xing)沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢測(ce)(ce)(ce)。該法(fa)(fa)(fa)(fa)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)預(yu)先包(bao)被(bei)了沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(A-E群)單(dan)克隆抗(kang)體的(de)(de)(de)微量板(ban),加入經(jing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理的(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)(pin),反(fan)應(ying)(ying)后(hou)再(zai)加入一(yi)定(ding)的(de)(de)(de)指示(shi)劑,作(zuo)用(yong)(yong)(yong)(yong)畢后(hou)用(yong)(yong)(yong)(yong)酶(mei)標(biao)(biao)儀(yi)測(ce)(ce)(ce)定(ding)OD值(zhi)來(lai)判(pan)定(ding)結(jie)(jie)果。食(shi)物樣(yang)品(pin)(pin)經(jing)適當(dang)的(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理,也(ye)可(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)此法(fa)(fa)(fa)(fa)進(jin)(jin)(jin)行(xing)沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢測(ce)(ce)(ce)。ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢出沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)極限范(fan)圍在105~106個細胞/ml,因此,要(yao)得(de)出可(ke)(ke)靠的(de)(de)(de)結(jie)(jie)果,食(shi)物樣(yang)品(pin)(pin)首先必需(xu)(xu)進(jin)(jin)(jin)行(xing)預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)、選擇(ze)性增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),通常(chang)還要(yao)在含有(you)D-甘露糖的(de)(de)(de)肉(rou)(rou)湯(M肉(rou)(rou)湯)中進(jin)(jin)(jin)行(xing)后(hou)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),以(yi)促進(jin)(jin)(jin)鞭毛(mao)發育(yu)。總的(de)(de)(de)來(lai)說(shuo),標(biao)(biao)準的(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)制備,約(yue)需(xu)(xu)要(yao)經(jing)過(guo)(guo)40~48h的(de)(de)(de)孵(fu)(fu)育(yu)才(cai)能完成。黎(li)兆(zhao)(zhao)滾等(deng)人(ren)的(de)(de)(de)微量板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)品(pin)(pin)制備過(guo)(guo)程分(fen)三步,共耗時(shi)(shi)(shi)24h:①選用(yong)(yong)(yong)(yong)營養肉(rou)(rou)湯進(jin)(jin)(jin)行(xing)預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(6h),使(shi)(shi)“致(zhi)傷”、冷凍的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)復蘇。②使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)選擇(ze)性培養基RV進(jin)(jin)(jin)行(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(14h),使(shi)(shi)沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)大量繁殖,同(tong)時(shi)(shi)(shi)抑制其它雜菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)生長。③使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)營養肉(rou)(rou)湯(蛋白胨水(shui))進(jin)(jin)(jin)行(xing)后(hou)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(4h),使(shi)(shi)沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)數(shu)量大大增(zeng)加。比上(shang)述標(biao)(biao)準的(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)品(pin)(pin)制備過(guo)(guo)程縮(suo)短了一(yi)半的(de)(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)。ELISA方法(fa)(fa)(fa)(fa)本身,則僅需(xu)(xu)要(yao)大約(yue)2h而已(yi)(其中30min是操作(zuo)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian),90min是孵(fu)(fu)育(yu)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian))。相比之下,黎(li)兆(zhao)(zhao)滾等(deng)人(ren)的(de)(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)(fa)可(ke)(ke)在27h內(nei)完成,比上(shang)述方法(fa)(fa)(fa)(fa)縮(suo)短了一(yi)半的(de)(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian),頗值(zhi)得(de)推廣應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)。最新式的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)免疫(yi)學檢測(ce)(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa),利用(yong)(yong)(yong)(yong)經(jing)特異性抗(kang)體敏化的(de)(de)(de)免疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)為基礎。幾(ji)滴(di)樣(yang)品(pin)(pin)加到卡(ka)片(pian)上(shang),結(jie)(jie)果可(ke)(ke)以(yi)直接用(yong)(yong)(yong)(yong)肉(rou)(rou)眼(yan)讀出。免疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)極易(yi)操作(zuo),且(qie)由于無需(xu)(xu)要(yao)特殊設備,很適合小型實驗室(shi)使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)。盡管卡(ka)片(pian)檢測(ce)(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)一(yi)樣(yang)需(xu)(xu)要(yao)對樣(yang)品(pin)(pin)進(jin)(jin)(jin)行(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理,但它(卡(ka)片(pian)法(fa)(fa)(fa)(fa))本身通常(chang)需(xu)(xu)時(shi)(shi)(shi)不超過(guo)(guo)10min,如果采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)黎(li)兆(zhao)(zhao)滾等(deng)人(ren)的(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)(pin)制備法(fa)(fa)(fa)(fa),則可(ke)(ke)使(shi)(shi)操作(zuo)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)更為縮(suo)短。
細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞核(he)(he)酸(suan)DNA和RNA是(shi)唯一(yi)(yi)一(yi)(yi)類可以攜(xie)帶(dai)信(xin)息的(de)(de)(de)大(da)(da)分(fen)(fen)子(zi)。由于(yu)所有(you)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞都含有(you)這(zhe)種(zhong)分(fen)(fen)子(zi),可以利用(yong)(yong)它(ta)作為(wei)(wei)(wei)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)的(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)靶(ba)。標(biao)(biao)(biao)靶(ba)通常是(shi)一(yi)(yi)個(ge)特異性(xing)核(he)(he)酸(suan)序列(lie),它(ta)可通過(guo)以補體(ti)(ti)(ti)核(he)(he)酸(suan)分(fen)(fen)子(zi)作為(wei)(wei)(wei)探(tan)針來檢(jian)(jian)(jian)出。與(yu)免(mian)疫(yi)學方法(fa)相(xiang)似,探(tan)針也需(xu)(xu)要(yao)(yao)加附(fu)適當的(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)記(ji),如放(fang)射(she)(she)(she)性(xing)同(tong)位(wei)(wei)素、酶(mei)(mei)(mei)或(huo)發光的(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)識(shi)物(wu)。Fitts等人在食品(pin)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)中(zhong)引(yin)入(ru)了第(di)一(yi)(yi)代(dai)DNA—RNA雜交(jiao)(jiao)技術,此(ci)(ci)法(fa)應(ying)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)探(tan)針含有(you)用(yong)(yong)放(fang)射(she)(she)(she)性(xing)同(tong)位(wei)(wei)素標(biao)(biao)(biao)記(ji)的(de)(de)(de)傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)DNA片段,其敏感性(xing)高(gao)(gao),經(jing)大(da)(da)約48h的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)步(bu)(bu)驟后,檢(jian)(jian)(jian)測(ce)極限可達108個(ge)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)/ml,但(dan)由于(yu)要(yao)(yao)使用(yong)(yong)放(fang)射(she)(she)(she)性(xing)同(tong)位(wei)(wei)素,只(zhi)能(neng)在專門(men)(men)(men)(men)的(de)(de)(de)實(shi)驗室應(ying)用(yong)(yong),此(ci)(ci)方法(fa)的(de)(de)(de)優點(dian)都被(bei)抵消了。為(wei)(wei)(wei)此(ci)(ci),以核(he)(he)酸(suan)雜交(jiao)(jiao)為(wei)(wei)(wei)基(ji)礎(chu)的(de)(de)(de)第(di)二代(dai)技術—比(bi)色計已(yi)發展起來。這(zhe)種(zhong)方法(fa)依賴于(yu)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)核(he)(he)糖體(ti)(ti)(ti)RNA(rRNA)—核(he)(he)糖體(ti)(ti)(ti)發育過(guo)程中(zhong)儲存的(de)(de)(de)核(he)(he)酸(suan)成(cheng)分(fen)(fen)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)。核(he)(he)糖體(ti)(ti)(ti)是(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞蛋白質合成(cheng)器(qi)的(de)(de)(de)一(yi)(yi)部分(fen)(fen),每個(ge)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞中(zhong)存在5000~20000個(ge)復(fu)制(zhi)體(ti)(ti)(ti),而(er)相(xiang)比(bi)之下染色體(ti)(ti)(ti)DNA復(fu)制(zhi)體(ti)(ti)(ti)僅2~10個(ge)。這(zhe)種(zhong)天然富含rRNA標(biao)(biao)(biao)靶(ba)序列(lie)的(de)(de)(de)情況使得用(yong)(yong)無輻射(she)(she)(she)計檢(jian)(jian)(jian)測(ce)成(cheng)為(wei)(wei)(wei)可能(neng),同(tong)時又保(bao)持了與(yu)放(fang)射(she)(she)(she)性(xing)同(tong)位(wei)(wei)素方法(fa)相(xiang)當或(huo)更高(gao)(gao)的(de)(de)(de)敏感性(xing)。其另(ling)一(yi)(yi)優點(dian)是(shi)由于(yu)rRNA為(wei)(wei)(wei)單鏈(lian)(而(er)DNA為(wei)(wei)(wei)雙鏈(lian)),雜交(jiao)(jiao)前無需(xu)(xu)經(jing)過(guo)變性(xing)步(bu)(bu)驟。要(yao)(yao)得到(dao)陽性(xing)結果,此(ci)(ci)法(fa)需(xu)(xu)要(yao)(yao)105個(ge)靶(ba)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞/ml,因此(ci)(ci)對(dui)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)來說,需(xu)(xu)要(yao)(yao)進行(xing)預增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)和選(xuan)擇性(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun),總(zong)共約50h。rRNA探(tan)針法(fa)比(bi)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)ELISA法(fa)(酶(mei)(mei)(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)法(fa))更耗時,但(dan)二者成(cheng)本相(xiang)近(jin)。食品(pin)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)法(fa)的(de)(de)(de)最新(xin)進展是(shi)在化學擴增(zeng)(zeng)體(ti)(ti)(ti)系方面的(de)(de)(de)發展,即聚合酶(mei)(mei)(mei)鏈(lian)反應(ying)(PCR),用(yong)(yong)該體(ti)(ti)(ti)系可對(dui)制(zhi)備好的(de)(de)(de)樣品(pin)進行(xing)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)DNA擴增(zeng)(zeng),以便更易于(yu)用(yong)(yong)諸如凝(ning)膠電泳(yong)法(fa)或(huo)比(bi)色型ELISA法(fa)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)。用(yong)(yong)于(yu)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)和其它(ta)以食物(wu)為(wei)(wei)(wei)載體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)PCR方法(fa)業已(yi)建立,其中(zhong)一(yi)(yi)些(xie)方法(fa)顯示(shi)了極好的(de)(de)(de)敏感性(xing)。但(dan)該法(fa)較難自動化,且必需(xu)(xu)經(jing)選(xuan)擇性(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)以稀釋可能(neng)干擾檢(jian)(jian)(jian)測(ce)反應(ying)的(de)(de)(de)某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)(fen)。一(yi)(yi)個(ge)完整的(de)(de)(de)以PCR為(wei)(wei)(wei)基(ji)礎(chu)的(de)(de)(de)方法(fa),需(xu)(xu)要(yao)(yao)2天才能(neng)完成(cheng),很大(da)(da)程度上抵銷了其高(gao)(gao)敏感性(xing)的(de)(de)(de)優點(dian),但(dan)這(zhe)種(zhong)方法(fa)對(dui)那些(xie)含沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)較少或(huo)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)“致傷(shang)”嚴重難以復(fu)蘇(su)而(er)仍保(bao)有(you)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)樣品(pin)尤其有(you)效(xiao)。