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電子顯微鏡的組成部分 電子顯微鏡樣本的預處理方法

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摘要:電子顯微鏡,簡稱電鏡,經過五十多年的發展已成為現代科學技術中不可缺少的重要工具。電子顯微鏡由鏡筒、真空裝置和電源柜三部分組成。我們知道電子顯微鏡對樣本的要求比較高,因此在觀察生物樣本的時候必須進行預處理。一般的處理過程包括:固定、冷固定、脫干、墊入、分割、染色等。接下來就一起來了解下電子顯微鏡的知識吧。

一、電子顯微鏡的組成

電子(zi)顯微鏡(jing)由鏡(jing)筒、真空裝置和電源柜三部(bu)分組成。

1、鏡筒

主要有電(dian)子源(yuan)、電(dian)子透鏡、樣品架、熒光屏和(he)探測(ce)器等(deng)部件(jian),這些部件(jian)通常是自(zi)上(shang)而下地裝(zhuang)配成一個(ge)柱體。

電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)用來(lai)聚焦電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi),是電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)筒中(zhong)最重(zhong)要的(de)(de)部件。一(yi)般(ban)使(shi)用的(de)(de)是磁(ci)(ci)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing),有(you)時也有(you)使(shi)用靜(jing)電(dian)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)。它用一(yi)個對稱于鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)筒軸線的(de)(de)空間電(dian)場或磁(ci)(ci)場使(shi)電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)軌(gui)跡向(xiang)軸線彎曲(qu)形成(cheng)聚焦,其作用與光學(xue)(xue)顯(xian)微鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)中(zhong)的(de)(de)光學(xue)(xue)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)(凸透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing))使(shi)光束聚焦的(de)(de)作用是一(yi)樣的(de)(de),所以稱為(wei)電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)。光學(xue)(xue)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)焦點是固(gu)定(ding)(ding)的(de)(de),而電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)焦點可以被調節,因此電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)不像光學(xue)(xue)顯(xian)微鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)那樣有(you)可以移動的(de)(de)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)系統。現代電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing)大(da)多采用電(dian)磁(ci)(ci)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(jing),由很穩(wen)定(ding)(ding)的(de)(de)直流勵(li)磁(ci)(ci)電(dian)流通過帶極(ji)(ji)(ji)靴的(de)(de)線圈產生(sheng)的(de)(de)強磁(ci)(ci)場使(shi)電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)聚焦。電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)源(yuan)是一(yi)個釋放自由電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)的(de)(de)陰(yin)極(ji)(ji)(ji),柵極(ji)(ji)(ji),一(yi)個環(huan)狀加速(su)電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)的(de)(de)陽極(ji)(ji)(ji)構成(cheng)的(de)(de)。陰(yin)極(ji)(ji)(ji)和陽極(ji)(ji)(ji)之(zhi)間的(de)(de)電(dian)壓差(cha)必(bi)須非(fei)常高,一(yi)般(ban)在數千伏到3百萬伏特之(zhi)間。它能發射并形成(cheng)速(su)度均勻的(de)(de)電(dian)子(zi)(zi)(zi)(zi)束,所以加速(su)電(dian)壓的(de)(de)穩(wen)定(ding)(ding)度要求不低于萬分(fen)之(zhi)一(yi)。

樣品(pin)(pin)可(ke)以穩定地放(fang)在樣品(pin)(pin)架上,此外(wai)往往還有(you)可(ke)以用來改變(bian)樣品(pin)(pin)(如移動、轉動、加熱、降溫、拉長等)的裝置。

探測器用來收集(ji)電(dian)子的信(xin)號或次級信(xin)號。

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2、真空裝置

用以保(bao)障顯微鏡內的真空(kong)狀態,這樣電子(zi)在(zai)其路徑上不會被吸收或偏向,由機(ji)械真空(kong)泵、擴散(san)泵和真空(kong)閥(fa)門等構成,并通過抽氣管道與(yu)鏡筒相聯接。

3、電源柜

由高壓發生器、勵磁電流穩流器和各種調節控制單元組成。

二、電子顯微鏡如何進行樣本處理

1、固定:為了盡量保存樣(yang)本(ben)的(de)原樣(yang)使(shi)用(yong)戊二醛來硬化樣(yang)本(ben)和使(shi)用(yong)鋨酸(suan)來染色(se)脂肪。

2、冷固(gu)定:將樣(yang)本放在液態的乙烷中速凍,這(zhe)樣(yang)水不會結晶(jing),而形成非晶(jing)體的冰(bing)。這(zhe)樣(yang)保存的樣(yang)品損壞(huai)比(bi)較小,但圖(tu)像的對比(bi)度非常低。

3、脫干:使(shi)用乙醇和(he)丙酮來(lai)取代水。

4、墊(dian)入(ru):樣(yang)本被墊(dian)入(ru)后可以(yi)分割。

5、分割:將(jiang)樣本(ben)使(shi)用(yong)金剛石刃(ren)切成薄片。

6、染(ran)色:重的原(yuan)子如鉛或鈾比輕的原(yuan)子散(san)射電子的能(neng)力(li)高(gao),因此(ci)可被用(yong)來提高(gao)對比度。

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