酶標(biao)(biao)儀實際上就是(shi)一臺變相光(guang)電(dian)比(bi)色(se)計或分光(guang)光(guang)度計,其基本工作原理與主要結構和(he)(he)光(guang)電(dian)比(bi)色(se)計基本相同(tong)(tong)。光(guang)源燈發(fa)出(chu)的光(guang)波(bo)經(jing)過(guo)濾光(guang)片或單(dan)色(se)器(qi)變成一束(shu)單(dan)色(se)光(guang),進入塑(su)料微(wei)孔極(ji)中的待測(ce)(ce)標(biao)(biao)本。該單(dan)色(se)光(guang)一部分被標(biao)(biao)本吸收,另(ling)一部分則透(tou)過(guo)標(biao)(biao)本照(zhao)射(she)到光(guang)電(dian)檢(jian)測(ce)(ce)器(qi)上,光(guang)電(dian)檢(jian)測(ce)(ce)器(qi)將這(zhe)一待測(ce)(ce)標(biao)(biao)本不同(tong)(tong)而(er)強弱不同(tong)(tong)的光(guang)信號轉換(huan)成相應的電(dian)信號,電(dian)信號經(jing)前置放(fang)大(da)(da),對數(shu)放(fang)大(da)(da),模數(shu)轉換(huan)等信號處(chu)(chu)理后送入微(wei)處(chu)(chu)理器(qi)進行數(shu)據處(chu)(chu)理和(he)(he)計算,最后由顯示器(qi)和(he)(he)打印機(ji)顯示結果。微(wei)處(chu)(chu)理機(ji)還通過(guo)控(kong)制電(dian)路控(kong)制機(ji)械驅(qu)動(dong)(dong)機(ji)構X方(fang)向(xiang)(xiang)和(he)(he)Y方(fang)向(xiang)(xiang)的運(yun)動(dong)(dong)來移動(dong)(dong)微(wei)孔板,從而(er)實現(xian)自動(dong)(dong)進樣檢(jian)測(ce)(ce)過(guo)程。而(er)另(ling)一些酶標(biao)(biao)儀則是(shi)采用手工移動(dong)(dong)微(wei)孔板進行檢(jian)測(ce)(ce),因(yin)此省去了X,Y方(fang)向(xiang)(xiang)的機(ji)械驅(qu)動(dong)(dong)機(ji)構和(he)(he)控(kong)制電(dian)路,從而(er)使(shi)儀器(qi)更小巧,結構也(ye)更簡單(dan)。
微孔(kong)(kong)(kong)板(ban)是一(yi)種經事先包埋專用于放置待(dai)測(ce)樣本的(de)透明(ming)塑料板(ban),板(ban)上有多排大小均勻一(yi)致(zhi)的(de)小孔(kong)(kong)(kong),孔(kong)(kong)(kong)內都包埋著相(xiang)應的(de)抗原或抗體(ti),微孔(kong)(kong)(kong)板(ban)上每個小孔(kong)(kong)(kong)可盛放零點幾毫升(sheng)的(de)溶液。
光(guang)(guang)是(shi)(shi)電磁波(bo),波(bo)長100nm~400nm稱(cheng)為紫(zi)外光(guang)(guang),400nm~780nm之間的(de)光(guang)(guang)可被人眼觀(guan)察到(dao),大(da)于780nm稱(cheng)為紅外光(guang)(guang)。人們(men)之所以能夠看到(dao)色(se)彩,是(shi)(shi)因(yin)為光(guang)(guang)照射到(dao)物體(ti)上被物體(ti)反射回來。綠色(se)植物之所以是(shi)(shi)綠色(se),是(shi)(shi)因(yin)為植物吸收(shou)的(de)大(da)部分為紅橙光(guang)(guang)和藍紫(zi)光(guang)(guang),但對綠色(se)不(bu)吸收(shou),反射出(chu)來,所以植物呈現(xian)為綠色(se)。酶標儀(yi)測(ce)定(ding)的(de)原理是(shi)(shi)在特定(ding)波(bo)長下,檢測(ce)被測(ce)物的(de)吸光(guang)(guang)值。
隨(sui)著檢(jian)測(ce)方式(shi)的發(fa)展,擁有多(duo)種檢(jian)測(ce)模式(shi)的單體臺式(shi)酶標(biao)儀叫做多(duo)功(gong)能(neng)酶標(biao)儀,可檢(jian)測(ce)吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏(pian)振(FP)、和化學發(fa)光(Lum)。
酶標儀從原(yuan)理上可以(yi)分(fen)為光(guang)柵型(xing)(xing)酶標儀和濾(lv)光(guang)片型(xing)(xing)酶標儀。光(guang)柵型(xing)(xing)酶標儀可以(yi)截取(qu)光(guang)源波長(chang)范圍內的任意(yi)波長(chang),而濾(lv)光(guang)片型(xing)(xing)酶標儀則根據選(xuan)配的濾(lv)光(guang)片,只能截取(qu)特(te)定波長(chang)進(jin)行檢測。
中心定位
儀(yi)器會自動對酶(mei)標孔進行(xing)(xing)中心定位,中心定位是要消(xiao)除酶(mei)標孔底的凸凹引起的厚(hou)薄(bo)不(bu)(bu)均帶(dai)來檢(jian)(jian)測的不(bu)(bu)準確。在對每一個(ge)酶(mei)標儀(yi)進行(xing)(xing)檢(jian)(jian)測時,儀(yi)器其實要進行(xing)(xing)35個(ge)點(dian)的測量,選(xuan)取最中間(jian)的5個(ge)點(dian)的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來(lai)校準由于電壓(ya)不穩或(huo)燈泡(pao)磨(mo)損帶來(lai)的影響(xiang)。
用途和其它提示
用于ELISA試劑的(de)測定,廣泛用于各種實(shi)驗室,包括(kuo)臨床實(shi)驗室。
質量控制
質量(liang)控制(zhi)是試劑檢測的重要(yao)因素(su)。請按照試劑說明書的要(yao)求進(jin)行質量(liang)控制(zhi)。
空白校正
有一些試(shi)(shi)劑(ji)盒的(de)說明書(shu)將(jiang)空(kong)白孔設(she)置為空(kong)氣,其它大多數空(kong)白孔的(de)設(she)置是用(yong)試(shi)(shi)劑(ji)來(lai)設(she)置的(de),請按(an)照試(shi)(shi)劑(ji)盒的(de)說明書(shu)要求進(jin)行(xing)。
檢測結果的解釋
由于有相當多的(de)(de)因素會(hui)影響(xiang)檢(jian)(jian)測的(de)(de)結(jie)果,如不同(tong)的(de)(de)酶標(biao)(biao)板,檢(jian)(jian)測試劑的(de)(de)體積,都會(hui)造成OD值的(de)(de)不同(tong),因此(ci),只有使用同(tong)一酶標(biao)(biao)板反應(ying)的(de)(de)試劑檢(jian)(jian)測結(jie)果才(cai)能比較和(he)分析。對結(jie)果的(de)(de)臨床解釋請依照試劑盒的(de)(de)說(shuo)明書進行。
規(gui)格有24孔(kong)(kong)板,48孔(kong)(kong)板,96孔(kong)(kong)板等多(duo)種,不(bu)同的(de)(de)儀器選用(yong)不(bu)同規(gui)格的(de)(de)孔(kong)(kong)板,對其可進行一孔(kong)(kong)一孔(kong)(kong)地(di)檢(jian)測或一排(pai)一排(pai)地(di)檢(jian)測。
酶標(biao)儀(yi)所用(yong)的(de)(de)單色(se)光(guang)(guang)(guang)既可(ke)(ke)通(tong)過相(xiang)干(gan)濾光(guang)(guang)(guang)片來(lai)獲得,也可(ke)(ke)用(yong)分光(guang)(guang)(guang)光(guang)(guang)(guang)度計相(xiang)同的(de)(de)單色(se)器來(lai)得到(dao).在(zai)使用(yong)濾光(guang)(guang)(guang)片作(zuo)濾波(bo)裝置時與普通(tong)比色(se)計一樣,濾光(guang)(guang)(guang)片即可(ke)(ke)放在(zai)微(wei)孔板的(de)(de)前面,也可(ke)(ke)放在(zai)微(wei)孔板的(de)(de)后(hou)面,聚光(guang)(guang)(guang)鏡,光(guang)(guang)(guang)欄后(hou)到(dao)達反射(she)鏡,經反射(she)鏡作(zuo)90°反射(she)后(hou)垂直通(tong)過比色(se)溶液,然(ran)后(hou)再(zai)經濾光(guang)(guang)(guang)片送(song)到(dao)光(guang)(guang)(guang)電管。
酶標儀和普通的光電比色計有以下幾(ji)點(dian)差異(yi):
(1)盛裝待測(ce)比色液的容(rong)器(qi)不再使(shi)用(yong)(yong)比色皿(min),而是使(shi)用(yong)(yong)塑料微孔(kong)板.微孔(kong)板常用(yong)(yong)透(tou)明的聚乙(yi)烯(xi)材(cai)料制(zhi)成,對抗原(yuan)抗體有(you)較(jiao)強(qiang)的吸附作用(yong)(yong),故用(yong)(yong)它作為固相載體。
(2)由于盛樣本(ben)的(de)塑料微孔板是(shi)(shi)多排多孔的(de),光線(xian)只能垂直穿(chuan)過(guo)(guo),因此酶標儀的(de)光束(shu)都是(shi)(shi)垂直通過(guo)(guo)待(dai)測溶液(ye)和微孔板的(de),光束(shu)既可是(shi)(shi)從上到下(xia),也(ye)可以是(shi)(shi)從下(xia)到上穿(chuan)過(guo)(guo)比色液(ye)。
(3)酶標儀(yi)通常(chang)不(bu)僅(jin)用A,有時也使(shi)用光(guang)密度(du)(du)OD來表示吸(xi)光(guang)度(du)(du).酶標儀(yi)可(ke)分為(wei)單通道(dao)和多(duo)通道(dao)2種(zhong)類型,單通道(dao)又有自動(dong)和手動(dong)2種(zhong)之分.自動(dong)型的儀(yi)器有X,Y方向(xiang)的機(ji)械驅動(dong)機(ji)構(gou),可(ke)將微孔板L的小孔一(yi)個(ge)個(ge)依(yi)次(ci)送(song)入光(guang)束下面測(ce)試,手動(dong)型則靠手工移動(dong)微孔板來進行測(ce)量。
在單通(tong)道(dao)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)的(de)基礎(chu)上又(you)發展了多(duo)通(tong)道(dao)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi),此類酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)一(yi)般都是自動化型(xing)的(de)。它設有多(duo)個(ge)光束和多(duo)個(ge)光電檢(jian)測器,如12個(ge)通(tong)道(dao)的(de)儀(yi)(yi)器設有12條(tiao)光束或12個(ge)光源,12個(ge)檢(jian)測器和12個(ge)放大器,在X方(fang)向的(de)機(ji)械驅動裝(zhuang)置的(de)作用下,樣品12個(ge)為(wei)一(yi)排被檢(jian)測.多(duo)通(tong)道(dao)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)的(de)檢(jian)測速度快(kuai),但其結構較(jiao)復雜(za)價格也(ye)較(jiao)高。
可廣泛應用于低紫外區(qu)的(de)DNA、RNA定(ding)量及(ji)純度分(fen)析(A260/A280)和蛋(dan)白定(ding)量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶動(dong)力學檢(jian)測(ce)(ce),酶聯免疫測(ce)(ce)定(ding)(ELISAs),細胞增殖與毒性分(fen)析,細胞凋亡檢(jian)測(ce)(ce)(MTT),報告基因檢(jian)測(ce)(ce)及(ji)G蛋(dan)白偶聯受體分(fen)析(GPCR)等。
酶(mei)標儀(MicroplateReader)是對酶(mei)聯免疫檢測(EIA)實(shi)驗結果進行讀(du)取和分析的(de)(de)(de)專業(ye)儀器。酶(mei)聯免疫反應(ying)通(tong)過偶聯在抗(kang)(kang)原或抗(kang)(kang)體上的(de)(de)(de)酶(mei)催化顯(xian)色(se)底物進行的(de)(de)(de),反應(ying)結果以顏色(se)顯(xian)示(shi),通(tong)過顯(xian)色(se)的(de)(de)(de)深(shen)淺即吸光度(du)值的(de)(de)(de)大小(xiao)就可以判斷(duan)標本中待測抗(kang)(kang)體或抗(kang)(kang)原的(de)(de)(de)濃(nong)度(du)。
酶(mei)標儀廣(guang)泛地應用在臨床檢(jian)驗、生物學研究、農業(ye)科(ke)學、食品和環境科(ke)學中,由于大(da)量的(de)酶(mei)聯免疫(yi)檢(jian)測試劑盒(he)的(de)應用,使得酶(mei)標儀在生殖保(bao)健領域中應用越來越廣(guang)泛,同時促進了(le)生殖健康技術水平提(ti)高。
國內許(xu)多計生站系(xi)統開(kai)展(zhan)了(le)酶免檢測(ce)項(xiang)目,如:乙肝五項(xiang)、艾滋病(bing)檢測(ce)、優生優育系(xi)列檢測(ce)、激素檢測(ce)等。過(guo)去多數采用目測(ce)方法,報出的結(jie)果(guo)缺(que)乏科學的依據。例如:某弓形蟲檢測(ce)試劑盒中,臨界(jie)值規定為:陰性對照品的OD值×2.5,通(tong)過(guo)目測(ce)無(wu)法判斷標本孔(kong)的反(fan)應顏(yan)(yan)(yan)色(se)是否超過(guo)臨界(jie)值。肉眼進行兩(liang)孔(kong)之間的顏(yan)(yan)(yan)色(se)比較可能還行,但比較一孔(kong)的顏(yan)(yan)(yan)色(se)是否超過(guo)另一孔(kong)顏(yan)(yan)(yan)色(se)的2.5倍就不(bu)可能。
國內多家權威機構,如衛生部(bu)臨床檢(jian)驗中心和計劃(hua)生育(yu)系統(tong)等(deng)多次(ci)強調(diao)酶(mei)標(biao)儀的(de)(de)(de)重要(yao)(yao)性,并(bing)(bing)要(yao)(yao)求(qiu)酶(mei)聯免(mian)(mian)疫檢(jian)測試(shi)(shi)劑應使用(yong)(yong)(yong)酶(mei)標(biao)儀判讀(du),酶(mei)免(mian)(mian)試(shi)(shi)劑的(de)(de)(de)質控也應使用(yong)(yong)(yong)酶(mei)標(biao)儀,并(bing)(bing)提(ti)供酶(mei)標(biao)儀測定的(de)(de)(de)原始數(shu)據,而(er)各廠家的(de)(de)(de)試(shi)(shi)劑盒說明書沒有是讓用(yong)(yong)(yong)目(mu)測的(de)(de)(de)。同時酶(mei)免(mian)(mian)檢(jian)測的(de)(de)(de)項(xiang)目(mu)往往是一些實質性的(de)(de)(de)感染(ran)(ran)和病變(如:肝(gan)炎、艾滋(zi)病、優(you)生優(you)育(yu)等(deng)),判讀(du)更要(yao)(yao)求(qiu)嚴(yan)謹(jin),由誤(wu)診引(yin)起(qi)的(de)(de)(de)糾紛很(hen)難處理。另外(wai),住院手(shou)(shou)術病人術前的(de)(de)(de)丙(bing)肝(gan)、艾滋(zi)等(deng)EIA試(shi)(shi)劑檢(jian)測是避(bi)免(mian)(mian)因輸(shu)血引(yin)起(qi)感染(ran)(ran)引(yin)發的(de)(de)(de)醫療(liao)事故糾紛的(de)(de)(de)必要(yao)(yao)手(shou)(shou)段,正逐漸被許多單位所采(cai)用(yong)(yong)(yong)。
1.外觀
酶標儀(yi)上應有儀(yi)器名稱,型號,編號,生(sheng)產廠(chang)家,出廠(chang)日期和電源電壓;各調(diao)節旋鈕,按鍵(jian)和開(kai)關均能正(zheng)常工作,外表面無明顯(xian)機械損(sun)傷;顯(xian)示文字應清(qing)楚完整(zheng)。
2.酶標(biao)儀的穩(wen)定性(漂(piao)移)
選用492nm波長,在吸光(guang)度0.0A處,測定(ding)標(biao)稱值(zhi)為1.0A的光(guang)譜中(zhong)性濾(lv)光(guang)片(測定(ding)操作按儀(yi)(yi)器說(shuo)明進行),記(ji)錄儀(yi)(yi)器示(shi)值(zhi)或均(jun)值(zhi),10min后再次(ci)記(ji)錄儀(yi)(yi)器示(shi)值(zhi)或均(jun)值(zhi),前后兩(liang)次(ci)測定(ding)值(zhi)之(zhi)差不應(ying)超過±0.005A。
3.吸光度測定的(de)準確(que)度
選用405,492和620nm波長(chang),以空氣為參比,分(fen)別(bie)測定(ding)標稱值(zhi)為0.5和1.0A的(de)光(guang)譜中性玻璃濾光(guang)片(pian),用專用測試板代替酶標板,按(an)儀器說(shuo)明(ming)連續測定(ding)3次,按(an)下式計算準確(que)度(du):AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標準值(zhi))。
4.吸光度測定的重復性
波長選擇同(3),在酶標(biao)板第(di)(di)一排加注空白溶液,第(di)(di)二排加入濃度(du)為200rig/ml的重鉻(ge)酸鉀溶液,重復測定(ding)5次。記錄每次測定(ding)的第(di)(di)二排吸光(guang)度(du)值,取第(di)(di)二排任一孔吸光(guang)度(du)值與各次對應孔吸光(guang)度(du)值。按下式計(ji)算重復性(xing):
5.酶標儀(yi)的線性
選用(yong)540nm波長,將標稱(cheng)值0.5,1.0A中性濾光片(pian)分別放入專(zhuan)用(yong)測試板樣本位置(zhi)中,以空氣為參比,各重復測定3次(ci);然(ran)后(hou)將以上兩片(pian)中性濾光片(pian)疊加后(hou)置(zhi)于專(zhuan)用(yong)測試板的同(tong)一孔(kong)位中,重復測定3次(ci)。
6.測定速度的檢定
選(xuan)用492nm波(bo)長,放入96孔酶標板(ban)進行測(ce)定,用秒表計測(ce)儀器打(da)印出(chu)全部(bu)數據(ju)的時(shi)間。
酶標儀除了在(zai)(zai)選購時,應(ying)盡可能自檢(jian)(jian)外(wai),在(zai)(zai)使用中也(ye)應(ying)定期檢(jian)(jian)定,以(yi)保證酶標儀測定的有效性。
1.光學系統
光(guang)柵光(guang)路系統(tong),包括內(nei)建的(de)參(can)比檢(jian)測通道,確(que)保任何測量(liang)情況下獲得一致(zhi)的(de)結(jie)果。
2.光路
長壽命閃爍氙燈光源,光柵單色光發生(sheng)器(qi),200~1000nm波長范圍(wei)內全波長掃描,1nm步進
3.檢測模式
在微(wei)孔板(ban)檢測模式和比色杯檢測模式下(xia)均可進(jin)行全波長范圍光譜掃描(miao),對樣(yang)品和空白同時掃描(miao)。
4.光(guang)譜掃描速度
10s,200~1000nm,1nm步(bu)進
5.樣品前處理
無需(xu)衍生(sheng)處理,即可直接測(ce)定DNA、RNA和(he)蛋白(bai)的(de)吸光值。
6.光程校準
使用(yong)(yong)微(wei)孔(kong)板檢測時可直接讀出OD值和濃度,對(dui)于水相溶液可使用(yong)(yong)光程(cheng)校(xiao)正
7.樣品容器
可使用96&384孔板(ban),或標準(zhun)杯/微量杯
8.帶寬
帶寬2.4nm
9.讀數范圍
0~4OD
10.線性范圍
@450nm:0~2.5Abs,±2%
11.檢(jian)測準確度
@450nm:1%+0.003Abs(0~2.0Abs),2%(2.0~2.5Abs)
12.檢測精度
@450nm<1.0%CV
13.檢測速度
8s/96孔(kong);13s/384孔(kong)
14.溫控范圍
微(wei)孔板和比(bi)色杯模式均具溫控功能,溫控范圍(室溫+4)~65℃
15.振蕩模式
軌(gui)道,雙軌(gui)道和線性(xing)三種調速振(zhen)蕩(dang)模式(shi),動力學過程中可執行(xing)背景振(zhen)蕩(dang)模式(shi)
16.數據處理及(ji)分析
通過(guo)PC端(duan)數據(ju)分(fen)析(xi)(xi)軟件Gen5進行操作(zuo)和(he)設置:曲線擬合(he)(he)、定量分(fen)析(xi)(xi)、定性分(fen)析(xi)(xi)、動(dong)力學計算(suan)、自定義(yi)方程(cheng)以(yi)、平行線分(fen)析(xi)(xi)(PLA,符(fu)合(he)(he)歐盟法(fa)規(gui)要求)及效價分(fen)析(xi)(xi)等。數據(ju)可一鍵導出到Excel,也可生成詳盡的結果報(bao)告。
17.電源
電源輸(shu)入(ru)100-240V(50/60Hz),最大功率消耗90W
18.體積
外部(bu)尺寸(HxWxD)216x216x406mm
19.重量
11kg
20.配置
全波(bo)長讀(du)數(shu)儀一套(tao)(含比(bi)色杯基座)(比(bi)色皿必須為立式),標準96孔酶標板一包,電源線壹根,說明書一份,軟件光盤一張。
酶(mei)標儀(yi)的功能(neng)是用(yong)(yong)(yong)來讀(du)取酶(mei)聯免疫試(shi)(shi)劑(ji)盒的反應結果(guo),因此要得到(dao)準(zhun)確結果(guo),試(shi)(shi)劑(ji)盒的使(shi)用(yong)(yong)(yong)必須規范。許多醫院在使(shi)用(yong)(yong)(yong)酶(mei)標儀(yi)之前是通過(guo)(guo)目測(ce)判斷結果(guo),操(cao)(cao)(cao)作(zuo)(zuo)過(guo)(guo)程隨意性較(jiao)大,在使(shi)用(yong)(yong)(yong)酶(mei)標儀(yi)后(hou)如果(guo)不能(neng)及時糾正操(cao)(cao)(cao)作(zuo)(zuo)習慣,會造成較(jiao)大誤差。在酶(mei)標儀(yi)的操(cao)(cao)(cao)作(zuo)(zuo)中應注意以下事(shi)項:
1.使用(yong)加(jia)液器加(jia)液,加(jia)液頭不能混用(yong)。
2.洗(xi)板要洗(xi)干凈(jing)。如果(guo)條(tiao)件(jian)允許,使(shi)用洗(xi)板機洗(xi)板,避免交叉污染。
3.嚴格(ge)按照(zhao)試劑(ji)盒的說明(ming)書(shu)操作,反(fan)應(ying)時間準(zhun)確(que)。
4.在測量(liang)過程中,請勿碰酶(mei)標板(ban),以防(fang)酶(mei)標板(ban)傳送(song)時擠(ji)傷操作人員的手(shou)。
5.請勿將樣品或試劑灑(sa)到儀器表(biao)面(mian)或內部,操(cao)作完成后請洗(xi)手(shou)。
6.如果使(shi)用的樣(yang)品或試劑具有(you)污染性、毒性和生物學危害,請嚴格(ge)按照試劑盒的操作(zuo)說明,以防對操作(zuo)人員造成損害。
7.如果儀器接(jie)觸過污染性(xing)或傳染性(xing)物(wu)品,請進行清洗和消毒。
8.不(bu)要在(zai)測量過程中關閉電源。
9.對于因試劑(ji)盒問題造成的(de)測量結果(guo)的(de)偏差(cha),應根據實際情況及時修改參(can)數(shu),以達到最佳效(xiao)果(guo)。
10.使(shi)用(yong)后蓋(gai)好防塵罩。
11.出現技(ji)術故障時應及時與廠家聯系,切勿(wu)擅自拆卸酶標儀(yi)。