一、膠原酶簡介

膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶按其存在(zai)的(de)方式不(bu)同可(ke)分為人(ren)體(ti)內源(yuan)性膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶和藥(yao)用(yong)膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶兩種。人(ren)體(ti)內源(yuan)性膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶是指(zhi)人(ren)體(ti)內部本(ben)身所(suo)具有的(de)膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶，如牙齦、觸膜等上皮(pi)組(zu)織和關節滑膜、椎(zhui)間盤(pan)內都不(bu)同程(cheng)度的(de)存在(zai)著這種膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶，它在(zai)體(ti)內膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白的(de)分解過程(cheng)中(zhong)發(fa)揮著不(bu)可(ke)或(huo)缺(que)的(de)作用(yong)。藥(yao)用(yong)膠(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶是指(zhi)利用(yong)生物制藥(yao)的(de)高科(ke)技手段(duan)從溶組(zu)織梭狀(zhuang)芽孢(bao)桿菌(jun)的(de)發(fa)酵液(ye)中(zhong)提取、純化并精制而得的(de)白色或(huo)類(lei)白色無菌(jun)凍(dong)干粉針生物制劑(ji)。

膠(jiao)(jiao)原酶(mei)（collagenase）是從(cong)溶組(zu)(zu)織(zhi)梭狀細(xi)(xi)胞芽(ya)孢桿菌提取(qu)制備的(de)，主(zhu)要水(shui)解(jie)結(jie)締組(zu)(zu)織(zhi)中(zhong)膠(jiao)(jiao)原蛋(dan)白成分。當擬消(xiao)化的(de)組(zu)(zu)織(zhi)較(jiao)硬，內含較(jiao)多結(jie)締組(zu)(zu)織(zhi)或膠(jiao)(jiao)原成分時，用(yong)(yong)胰蛋(dan)白酶(mei)解(jie)離細(xi)(xi)胞的(de)效果較(jiao)差，這時可采用(yong)(yong)膠(jiao)(jiao)原酶(mei)解(jie)離細(xi)(xi)胞法。 膠(jiao)(jiao)原酶(mei)僅對(dui)細(xi)(xi)胞間質有消(xiao)化作用(yong)(yong)而對(dui)上皮細(xi)(xi)胞影響不大(da)。因此適(shi)于消(xiao)化分離纖維性組(zu)(zu)織(zhi)、上皮及癌組(zu)(zu)織(zhi)，可使上皮細(xi)(xi)胞與膠(jiao)(jiao)原成分分離而不受損害。常(chang)用(yong)(yong)劑量為(wei)最(zui)終(zhong)濃度200U/ml（約為(wei)1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠(jiao)(jiao)原酶(mei)分為(wei)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xi)(xi)胞專用(yong)(yong)膠(jiao)(jiao)原酶(mei)，要根據所(suo)要分離消(xiao)化的(de)組(zu)(zu)織(zhi)類型選擇(ze)膠(jiao)(jiao)原酶(mei)類型。

1、膠(jiao)原酶Ⅰ用于上(shang)(shang)皮、肺，脂肪(fang)和腎上(shang)(shang)腺(xian)組(zu)織(zhi)細胞(bao)的分(fen)離(li)。用于消(xiao)化組(zu)織(zhi)中連接(jie)部分(fen)使其成為單(dan)個細胞(bao)，用于哺乳動(dong)細胞(bao)的分(fen)離(li)。

2、膠(jiao)原酶Ⅳ包含至少(shao)7種蛋白酶成分，分子量(liang)從(cong)68-130KD不等。它能(neng)消化多種組織。

3、膠原酶Ⅴ包含至(zhi)少(shao)7種蛋白酶成(cheng)分，分子量從68-130KD不等。它(ta)可用于胰腺(xian)小島(dao)組織的分離，將結締組織分離成(cheng)單個細胞。

4、膠原酶(mei)Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀腺，心(xin)臟和唾液腺組(zu)織。

二、如何配置膠原酶

膠(jiao)原酶溶液(ye)同胰蛋白酶一樣配制、消(xiao)毒滅菌(jun)和(he)儲藏。

注(zhu)意：因為Ⅰ型膠原酶分(fen)子顆(ke)粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除(chu)菌。 　　鈣、鎂離(li)子和血清成分(fen)不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含(han)血清的培養液配制。

三、膠原酶的使用

1、將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小(xiao)塊。

2、將(jiang)組織塊放(fang)入離心管（三角(jiao)燒(shao)瓶）中加入30~50倍體積的膠原酶(mei)溶液，旋緊蓋子（密封(feng)燒(shao)瓶）。

3、將燒瓶放入37℃水(shui)浴或者37℃孵箱內，每隔3min振搖一(yi)次，如(ru)能(neng)放在37℃的(de)恒溫震(zhen)蕩(dang)水(shui)浴箱中則更好(hao)。消化時(shi)間與組(zu)織(zhi)(zhi)的(de)類別很有關(guan)系，對(dui)(dui)(dui)于某些腫瘤組(zu)織(zhi)(zhi)或其他較(jiao)致(zhi)密結締組(zu)織(zhi)(zhi)，消化時(shi)間4~48h，對(dui)(dui)(dui)于容(rong)易(yi)(yi)消化的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)可(ke)以(yi)采用37℃震(zhen)蕩(dang)消化15~45min，也可(ke)以(yi)根據具體情(qing)況(kuang)而(er)定。如(ru)組(zu)織(zhi)(zhi)塊已(yi)分(fen)散(san)而(er)失去塊的(de)形狀，一(yi)經(jing)(jing)搖動即成細(xi)胞(bao)團(tuan)或單(dan)個細(xi)胞(bao)，可(ke)以(yi)認為已(yi)消化充分(fen)。上(shang)皮組(zu)織(zhi)(zhi)經(jing)(jing)膠(jiao)原酶消化后(hou)，由于上(shang)皮細(xi)胞(bao)對(dui)(dui)(dui)此酶有耐受性(xing)，可(ke)能(neng)仍有一(yi)些細(xi)胞(bao)團(tuan)未完全分(fen)散(san)，但成團(tuan)的(de)上(shang)皮細(xi)胞(bao)比(bi)分(fen)散(san)的(de)單(dan)個上(shang)皮細(xi)胞(bao)更易(yi)(yi)生長，因(yin)此，如(ru)無特殊(shu)需(xu)要可(ke)以(yi)不必再進一(yi)步處理(li)。

4、收(shou)集消(xiao)化(hua)(hua)液（有時含(han)個別組(zu)織塊及沒有充分消(xiao)化(hua)(hua)的組(zu)織碎屑則需用(yong)100目不銹鋼網(wang)過濾），離(li)心(xin)1000r/min，5min，去(qu)除(chu)上清(qing)，用(yong)Hanks液或者無血(xue)清(qing)培養(yang)液離(li)心(xin)漂洗1~2次，去(qu)除(chu)上清(qing)，加培養(yang)液制成(cheng)細胞(bao)懸液，接種培養(yang)瓶(ping)。