豬瘟病(bing)毒存活(huo)時(shi)間 豬瘟疫苗
豬瘟(wen)俗(su)稱“爛腸瘟(wen)”,是由黃(huang)病(bing)毒(du)科豬瘟(wen)病(bing)毒(du)屬(shu)的豬瘟(wen)病(bing)毒(du)引起的一種急性(xing)(xing)、發熱、接觸性(xing)(xing)傳染(ran)(ran)傳染(ran)(ran)病(bing)。具有高度傳染(ran)(ran)性(xing)(xing)和致死性(xing)(xing)。
1病情詳情
豬瘟俗稱"爛(lan)腸瘟"是一(yi)(yi)種(zhong)具有高度(du)傳(chuan)染性(xing)(xing)疫病,是威脅養豬業的主(zhu)要傳(chuan)染病之一(yi)(yi),其(qi)特征是:急性(xing)(xing),呈敗血性(xing)(xing)變(bian)化(hua),實質器官出血,壞死和梗死;慢(man)性(xing)(xing)呈纖維素(su)性(xing)(xing)壞死性(xing)(xing)腸炎,后期(qi)常(chang)有副傷寒及巴氏(shi)桿菌(jun)病繼發。
豬(zhu)瘟(wen)是(shi)豬(zhu)的(de)(de)一(yi)種急性(xing)接觸(chu)性(xing)傳(chuan)染(ran)病(bing),又稱豬(zhu)霍(huo)亂。1885年(nian)首先在美國(guo)(guo)發現,以后(hou)傳(chuan)播到世界各(ge)大洲。中(zhong)(zhong)國(guo)(guo)大部分省都(dou)有發生。1903年(nian)美國(guo)(guo)獸醫(yi)學家德希尼茲和多賽特鑒定本病(bing)的(de)(de)病(bing)原(yuan)是(shi)披蓋病(bing)毒科的(de)(de)瘟(wen)病(bing)毒屬(Pestivirus)中(zhong)(zhong)的(de)(de)豬(zhu)瘟(wen)病(bing)毒。主要通過直(zhi)接接觸(chu),或由于接觸(chu)污染(ran)的(de)(de)媒介物而發病(bing)。消化道、鼻腔粘膜和破裂的(de)(de)皮(pi)膚均是(shi)感染(ran)途徑(jing)。一(yi)年(nian)四季都(dou)可發生,以春夏多雨季節(jie)為多。
人工(gong)接(jie)種的(de)豬(zhu)(zhu),一(yi)般在(zai)36~48小時(shi)(shi)后(hou)體(ti)溫(wen)升高(gao)。而自然感染的(de)潛伏期(qi)常(chang)(chang)(chang)為(wei)3~6天(tian)(tian),間(jian)有(you)(you)延(yan)長到24天(tian)(tian)的(de)。典(dian)(dian)型(xing)(xing)(xing)(xing)病例表現(xian)為(wei)最急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)、亞急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)或(huo)慢性(xing)(xing)(xing)(xing)病程,死(si)(si)亡(wang)率(lv)高(gao)。最急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)(xing)(xing)較(jiao)少見,病豬(zhu)(zhu)體(ti)溫(wen)升高(gao),常(chang)(chang)(chang)無其(qi)他癥(zheng)狀,1~2天(tian)(tian)內(nei)死(si)(si)亡(wang)。急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)(xing)(xing)最常(chang)(chang)(chang)見,體(ti)溫(wen)可(ke)上升到41℃以上,食(shi)欲減(jian)退(tui)或(huo)消失,可(ke)發生眼結膜炎(yan)并有(you)(you)膿性(xing)(xing)(xing)(xing)分(fen)泌物,鼻腔也常(chang)(chang)(chang)流出(chu)(chu)膿性(xing)(xing)(xing)(xing)粘(zhan)液,間(jian)有(you)(you)嘔吐,有(you)(you)時(shi)(shi)排(pai)泄物中帶血液,甚至便(bian)血。初期(qi)耳根、腹部、股內(nei)側的(de)皮膚常(chang)(chang)(chang)有(you)(you)許多點(dian)狀出(chu)(chu)血或(huo)較(jiao)大紅點(dian)。病程一(yi)般為(wei)1~2周,最后(hou)絕大多數死(si)(si)亡(wang)。亞急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)(xing)(xing)常(chang)(chang)(chang)見于(yu)本病流行地區,病程可(ke)延(yan)至2~3周;有(you)(you)的(de)轉為(wei)慢性(xing)(xing)(xing)(xing),常(chang)(chang)(chang)拖延(yan)1~2個(ge)月。表現(xian)粘(zhan)膜蒼白,眼瞼有(you)(you)出(chu)(chu)血點(dian)。皮膚出(chu)(chu)現(xian)紫(zi)斑,病豬(zhu)(zhu)極度消瘦。死(si)(si)亡(wang)以仔豬(zhu)(zhu)為(wei)多,成年豬(zhu)(zhu)有(you)(you)的(de)可(ke)以耐過。非典(dian)(dian)型(xing)(xing)(xing)(xing)病豬(zhu)(zhu)臨診癥(zheng)狀不明(ming)顯,呈慢性(xing)(xing)(xing)(xing),常(chang)(chang)(chang)見于(yu)“架子豬(zhu)(zhu)”。剖檢時(shi)(shi)急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)(xing)(xing)以出(chu)(chu)血性(xing)(xing)(xing)(xing)病變為(wei)主(zhu),常(chang)(chang)(chang)見腎皮質和膀胱粘(zhan)膜中有(you)(you)小點(dian)出(chu)(chu)血;腸(chang)(chang)系膜淋巴結腫脹,常(chang)(chang)(chang)出(chu)(chu)現(xian)出(chu)(chu)血性(xing)(xing)(xing)(xing)腸(chang)(chang)炎(yan),以大腸(chang)(chang)粘(zhan)膜中的(de)鈕扣狀潰瘍為(wei)典(dian)(dian)型(xing)(xing)(xing)(xing)。
根據流(liu)行(xing)病學、臨診(zhen)癥(zheng)狀(zhuang)和(he)病理變化(hua)可作出初(chu)診(zhen)。實(shi)驗室診(zhen)斷手段多采用(yong)免疫(yi)(yi)(yi)螢(ying)光技術、酶聯免疫(yi)(yi)(yi)吸(xi)附(fu)測定(ding)法、血清(qing)(qing)中和(he)試驗、瓊脂(zhi)凝膠沉淀試驗等,比較靈敏迅速,且(qie)特異性高。中國現推(tui)廣應用(yong)免疫(yi)(yi)(yi)螢(ying)光技術和(he)酶聯免疫(yi)(yi)(yi)吸(xi)附(fu)測定(ding)法。采用(yong)抗豬瘟血清(qing)(qing)在病初(chu)可有一(yi)定(ding)療(liao)效,此外尚無其他特效藥物。中國的豬瘟兔化(hua)弱毒(du)疫(yi)(yi)(yi)苗免疫(yi)(yi)(yi)期可達一(yi)年(nian)以上,已被公認為一(yi)種安全性良好、免疫(yi)(yi)(yi)原性優越、遺傳(chuan)性穩定(ding)的弱毒(du)疫(yi)(yi)(yi)苗。
本病與非洲(zhou)豬(zhu)瘟不同。非洲(zhou)豬(zhu)瘟在(zai)中國(guo)迄今尚未發現(xian)。
2流行特點
本病(bing)在自然條件下只(zhi)感(gan)(gan)(gan)(gan)染(ran)豬(zhu),不(bu)同年齡(ling)、性(xing)別、品(pin)種的(de)(de)豬(zhu)和(he)野豬(zhu)都易感(gan)(gan)(gan)(gan),一年四季均可發生。病(bing)豬(zhu)是(shi)主要(yao)(yao)傳染(ran)源(yuan),病(bing)豬(zhu)排(pai)泄物和(he)分泌物,病(bing)死豬(zhu)和(he)臟器(qi)及(ji)尸體、急宰病(bing)豬(zhu)的(de)(de)血、肉(rou)、內臟、廢水、廢料污染(ran)的(de)(de)飼料,飲水都可散(san)播病(bing)毒(du)(du),豬(zhu)瘟的(de)(de)傳播主要(yao)(yao)通過接觸,經(jing)消化道感(gan)(gan)(gan)(gan)染(ran)。此(ci)外,患(huan)病(bing)和(he)弱毒(du)(du)株感(gan)(gan)(gan)(gan)染(ran)的(de)(de)母豬(zhu)也可以經(jing)胎(tai)盤垂直感(gan)(gan)(gan)(gan)染(ran)胎(tai)兒(er),產生弱仔豬(zhu)、死胎(tai)、木乃伊胎(tai)等。
3潛伏期
簡介
一般為(wei)5—7天,根據臨床(chuang)癥(zheng)狀可分為(wei)最急性(xing)、急性(xing)、慢(man)性(xing)和溫和型(xing)四種類(lei)型(xing)。
最急性型
A:最急(ji)性(xing)型:病(bing)豬常無(wu)明顯癥狀,突然死(si)亡,一般出現在初發病(bing)地區和(he)流(liu)行初期。
急性型
B:急性型:病豬精神(shen)差,發(fa)熱(re),體溫在40—42℃之間,呈現(xian)稽留熱(re),喜臥、弓(gong)背、寒顫及(ji)(ji)行走(zou)搖晃。食欲減退或廢絕,喜歡(huan)飲水,有(you)的(de)發(fa)生嘔(ou)吐。結膜(mo)發(fa)炎,流(liu)膿(nong)性分泌物,將上下眼(yan)瞼(jian)粘(zhan)住,不能(neng)張(zhang)開,鼻(bi)(bi)流(liu)膿(nong)性鼻(bi)(bi)液(ye)(ye)。初期(qi)便(bian)秘,干硬的(de)糞球表(biao)面(mian)附有(you)大(da)量白色的(de)腸粘(zhan)液(ye)(ye),后(hou)期(qi)腹(fu)瀉,糞便(bian)惡臭,帶有(you)粘(zhan)液(ye)(ye)或血液(ye)(ye),病豬的(de)鼻(bi)(bi)端、耳后(hou)根、腹(fu)部及(ji)(ji)四肢(zhi)內側(ce)的(de)皮膚及(ji)(ji)齒齦、唇(chun)內、肛門等處粘(zhan)膜(mo)出(chu)現(xian)針尖狀出(chu)血點,指壓不退色,腹(fu)股溝淋(lin)巴結腫大(da)。公豬包皮發(fa)炎,陰鞘積尿,用手擠壓時(shi)有(you)惡臭渾(hun)濁液(ye)(ye)體射出(chu)。小豬可出(chu)現(xian)神(shen)經(jing)癥狀,表(biao)現(xian)磨(mo)牙、后(hou)退、轉圈、強直、側(ce)臥及(ji)(ji)游(you)泳狀,甚(shen)至昏迷(mi)等。
慢性型
C:慢性型(xing):多由急性型(xing)轉變而來,體溫時高時低,食欲不振,便秘與腹(fu)瀉交替(ti)出現,逐漸消瘦、貧血,衰弱(ruo),被毛(mao)粗亂,行走時兩(liang)后肢(zhi)搖晃無(wu)力,行走不穩(wen)。有些病(bing)豬的耳尖、尾(wei)端和四肢(zhi)下部(bu)成藍紫(zi)色或壞(huai)死、脫落,病(bing)程可長達(da)一個(ge)月以(yi)上,最(zui)后衰弱(ruo)死亡(wang),死亡(wang)率極高。
溫和型
D:溫和(he)型:又稱(cheng)非(fei)典型,主(zhu)要發生(sheng)較(jiao)(jiao)多的是(shi)斷奶后的仔(zi)豬及架子(zi)豬,表現癥(zheng)狀(zhuang)輕微(wei),不(bu)典型,病(bing)情緩和(he),病(bing)理變化不(bu)明顯,病(bing)程較(jiao)(jiao)長體溫稽留在40℃左右,皮膚無出血小點(dian),但有(you)淤(yu)血和(he)壞死,食欲時好時壞,糞便(bian)時干時稀(xi),病(bing)豬十(shi)分瘦弱,致死率(lv)較(jiao)(jiao)高,也有(you)耐過的,但生(sheng)長發育嚴(yan)重(zhong)受阻。
4剖檢病變
急性型
全身(shen)皮膚、漿(jiang)膜(mo)、粘(zhan)膜(mo)和內臟器官有不(bu)同程度的出血。全身(shen)淋(lin)巴結腫脹,
多汁、充(chong)血(xue)、出(chu)(chu)血(xue)、外(wai)表呈現(xian)紫黑色,切(qie)面如大理石狀,腎臟色淡,皮質有(you)(you)針尖至小米狀的出(chu)(chu)血(xue)點,脾臟有(you)(you)梗寒(han),以邊緣(yuan)多見,呈色黑小紫塊(kuai),喉頭粘(zhan)膜及扁桃(tao)體出(chu)(chu)血(xue)。膀胱(guang)粘(zhan)膜有(you)(you)散在(zai)的出(chu)(chu)血(xue)點。胃、腸(chang)粘(zhan)膜呈卡他性炎癥。大腸(chang)的回盲瓣處(chu)形成紐(niu)扣狀潰瘍。
慢性型
主要表現為壞死性(xing)腸炎,全身性(xing)出血變(bian)化不明顯,由(you)于(yu)鈣磷代謝(xie)的擾(rao)亂(luan),
斷(duan)奶病豬可見(jian)肋骨末(mo)端和(he)軟骨組織變界(jie)處(chu),因骨化障礙而形(xing)成的黃色骨化線。
實驗室診斷
在口述診斷的基礎上(shang),可用免(mian)疫熒(ying)光抗體檢查,酶標記組織抗
原定位法(fa),免(mian)(mian)體(ti)交(jiao)互免(mian)(mian)疫試驗,血(xue)清中(zhong)和試驗,豬瘟(wen)單克隆抗(kang)體(ti)純化酶聯免(mian)(mian)疫吸附試驗等方法(fa)之(zhi)一(yi)進行確診。
5防治措施
預(yu)防:A、免(mian)疫接種。B、開展免(mian)疫監(jian)測,采用酶聯免(mian)疫吸附試驗(yan)或正向間
接血凝試驗等方法(fa)開展(zhan)免疫抗體監測。C、及時淘汰隱性感染帶毒(du)種豬(zhu)(zhu)。D、堅持(chi)自繁自養(yang),全進(jin)全出的(de)飼養(yang)管理制度(du)。E、做好豬(zhu)(zhu)場(chang)、豬(zhu)(zhu)舍(she)的(de)隔離、衛生、消毒(du)和(he)殺蟲工作,減少豬(zhu)(zhu)瘟病毒(du)的(de)侵(qin)入。
6疫情處理
A、立即報告,及時診斷。B、劃定疫(yi)(yi)點。C、封鎖疫(yi)(yi)點、疫(yi)(yi)區(qu)。D、處理(li)病豬(zhu),做出(chu)無(wu)(wu)害(hai)化處理(li)。E、緊急(ji)預防接種。疫(yi)(yi)區(qu)里的假定健康(kang)豬(zhu)和受威脅(xie)地(di)區(qu)的生豬(zhu)即接種豬(zhu)瘟(wen)免弱毒(du)疫(yi)(yi)苗。F、消毒(du),認真消毒(du)被污染(ran)的場地(di)、圈舍、用具等,糞(fen)便堆積發酵、無(wu)(wu)害(hai)化處理(li)豬(zhu)瘟(wen)(hogcholera,HC或SWliqefever,sF)
7疫苗種類
豬(zhu)瘟是(shi)(shi)一種(zhong)(zhong)傳(chuan)染性(xing)非常強的(de)傳(chuan)染病,常給(gei)養豬(zhu)業(ye)造成毀(hui)滅性(xing)損(sun)失。預防豬(zhu)瘟最(zui)有效(xiao)的(de)方法(fa)就是(shi)(shi)接種(zhong)(zhong)豬(zhu)瘟疫(yi)(yi)苗。為了使(shi)廣大(da)養豬(zhu)戶(hu)正確選擇和有效(xiao)使(shi)用豬(zhu)瘟疫(yi)(yi)苗,這里將豬(zhu)瘟疫(yi)(yi)苗的(de)種(zhong)(zhong)類(lei)和使(shi)用方法(fa)簡介(jie)如下(xia): 疫(yi)(yi)苗的(de)種(zhong)(zhong)類(lei)
目前市(shi)場上預(yu)防豬瘟的疫苗主要有以下(xia)三(san)種:
1.豬瘟活疫苗(I)———乳兔苗。
2.豬瘟(wen)活(huo)疫苗(miao)(II)———細胞苗(miao)。
3.豬瘟活疫苗(I)———淋(lin)脾(pi)苗。
8使用方法
豬(zhu)瘟活(huo)疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)(I)———乳兔(tu)苗(miao)(miao)的用(yong)法該疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)為肌肉或皮下注射(she)(she)。使(shi)用(yong)時按瓶簽(qian)注明頭(tou)份用(yong)無(wu)菌(jun)生理鹽水按每頭(tou)份1毫(hao)升稀釋,大小(xiao)豬(zhu)均為1毫(hao)升。該疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)禁(jin)止與(yu)菌(jun)苗(miao)(miao)同時注射(she)(she)。注射(she)(she)本苗(miao)(miao)后(hou)可能(neng)有(you)少數豬(zhu)在(zai)1天-2天內發生反應(ying),但3日后(hou)即可恢復正常(chang)。注苗(miao)(miao)后(hou)如出現過敏(min)反應(ying),應(ying)及時注射(she)(she)抗(kang)過敏(min)藥物,如腎上腺素等。該疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)要(yao)在(zai)-15℃以下避光保存,有(you)效期為12個(ge)月。該疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)稀釋后(hou),應(ying)放在(zai)冷藏容器內,嚴禁(jin)結冰(bing),如氣溫(wen)在(zai)15℃以下,6小(xiao)時內要(yao)用(yong)完;如氣溫(wen)在(zai)15℃-27℃,應(ying)在(zai)3小(xiao)時內用(yong)完。注射(she)(she)的時間(jian)最好是(shi)進食后(hou)2小(xiao)時或進食前。
豬(zhu)瘟活(huo)疫(yi)苗(II)———細胞苗的用法(fa)該疫(yi)苗大(da)小豬(zhu)都(dou)可(ke)使用。按標簽注(zhu)(zhu)(zhu)明頭份,每頭份加入無菌生(sheng)理鹽(yan)水1毫(hao)升(sheng)稀釋后(hou)(hou),大(da)小豬(zhu)均(jun)皮下或肌(ji)肉注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)1毫(hao)升(sheng)。注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)4天后(hou)(hou)即可(ke)產生(sheng)免疫(yi)力,注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)后(hou)(hou)免疫(yi)期可(ke)達12個(ge)月。該疫(yi)苗宜在-15℃以下保存(cun),有效(xiao)期為18個(ge)月。注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)前(qian)應了解當地確無疫(yi)病流(liu)行。隨用隨稀釋,稀釋后(hou)(hou)的疫(yi)苗應放冷暗(an)處,并限2小時內用完。斷奶前(qian)仔豬(zhu)可(ke)接種4頭份疫(yi)苗,以防(fang)母(mu)源抗體干擾。
豬瘟活(huo)疫(yi)苗(miao)(I)———淋脾(pi)苗(miao)的用(yong)(yong)(yong)法該疫(yi)苗(miao)為肌肉或(huo)皮下注射。使用(yong)(yong)(yong)時(shi)(shi)按(an)瓶(ping)簽注明(ming)頭(tou)份(fen)(fen)用(yong)(yong)(yong)無菌生理鹽水按(an)每頭(tou)份(fen)(fen)1毫升(sheng)稀釋,大小豬均1毫升(sheng)。該疫(yi)苗(miao)應(ying)在-15℃以下避光保存,有(you)效期為12個月。疫(yi)苗(miao)稀釋后(hou),應(ying)放在冷藏容(rong)器內,嚴禁結冰(bing)。如氣溫在15℃以下,6小時(shi)(shi)內用(yong)(yong)(yong)完。如氣溫在15℃-27℃,則應(ying)在3小時(shi)(shi)內用(yong)(yong)(yong)完。注射的時(shi)(shi)間最好是(shi)進食后(hou)2小時(shi)(shi)或(huo)進食前。
注意事項
以上三種疫苗(miao)在沒有豬瘟流行(xing)的(de)地(di)區,斷奶后無母源抗體的(de)仔豬,注射1次即可。
在(zai)有疫(yi)情(qing)威(wei)脅時(shi),仔豬(zhu)可(ke)在(zai)21日(ri)(ri)齡(ling)-30日(ri)(ri)齡(ling)和65日(ri)(ri)齡(ling)左右各(ge)注射(she)1次。
被(bei)注(zhu)射疫苗的(de)豬(zhu)必須健康無病,如(ru)豬(zhu)體質瘦弱、有(you)病,體溫升(sheng)高或食欲不(bu)振等均(jun)不(bu)應注(zhu)射。
注射免疫(yi)用(yong)(yong)各種工具,須(xu)在用(yong)(yong)前消毒(du)。每注射1頭豬,必須(xu)更(geng)換一次煮沸消毒(du)過的針(zhen)(zhen)頭,嚴禁(jin)打(da)“飛針(zhen)(zhen)”。
注射(she)部位應先剪毛(mao),然后用碘酒(jiu)消毒,再(zai)進(jin)行注射(she)。
以上三種疫苗如果(guo)在有豬瘟發生的地區使用,必(bi)須由獸醫(yi)嚴格指導,注射后防疫人(ren)員應在1周(zhou)內進行(xing)逐日觀(guan)察(cha)。
9治療進展
簡介
在(zai)歐洲稱為古典(dian)豬(zhu)瘟(wen){classicalswinefever.CSF),是由(you)(you)豬(zhu)瘟(wen)病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(HCV或CSFV)引起的(de)(de)(de)(de)一(yi)種高度接觸性傳染病(bing)(bing)(bing)(bing),豬(zhu)是該病(bing)(bing)(bing)(bing)毒唯一(yi)的(de)(de)(de)(de)自(zi)然宿主。于1833年首次發現(xian)于美國俄(e)亥俄(e)州,百余年來(lai)其(qi)流行遍及全球。國際(ji)獸疫(yi)(yi)(yi)局將其(qi)定為A類傳染病(bing)(bing)(bing)(bing),中國《動物(wu)防(fang)疫(yi)(yi)(yi)法》將其(qi)列為一(yi)類傳染病(bing)(bing)(bing)(bing).是目前(qian)危害中國養豬(zhu)業發展的(de)(de)(de)(de)主要疫(yi)(yi)(yi)病(bing)(bing)(bing)(bing)之一(yi)。中國豬(zhu)瘟(wen)兔(tu)化弱毒疫(yi)(yi)(yi)苗(miao)在(zai)防(fang)治豬(zhu)瘟(wen)中曾起到決(jue)定性作(zuo)用(yong),但近幾年來(lai)出現(xian)免疫(yi)(yi)(yi)效果(guo)不理想.應(ying)用(yong)組織(zhi)培養弱毒苗(miao)也發生免疫(yi)(yi)(yi)失敗,究(jiu)其(qi)原因比(bi)較多。由(you)(you)于豬(zhu)瘟(wen)造成(cheng)的(de)(de)(de)(de)經濟(ji)損(sun)失巨大(da).歷來(lai)是各國研究(jiu)的(de)(de)(de)(de)熱點。
csFV基因(yin)結構與功能的研究
CSFV為(wei)有(you)囊膜病(bing)毒,40--60nm,單股正(zheng)鏈RNA。CSFV基(ji)因(yin)組長約123kb,僅含(han)有(you)一(yi)個大的開放(fang)性閱讀框架(ORF).此ORF翻(fan)譯成(cheng)含(han)3898個氨(an)基(ji)酸殘基(ji).分子(zi)量(liang)約438kDa的多(duo)聚蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai),并進一(yi)步在(zai)病(bing)毒和(he)(he)(he)宿主細(xi)胞蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)酶的作用(yong)下(xia)加工為(wei)成(cheng)熟蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai).cSFV的所有(you)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)和(he)(he)(he)非(fei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)均(jun)(jun)由該ORF所編碼。ORF兩側是5’一(yi)端非(fei)翻(fan)譯區(qu)(5’-UTR)和(he)(he)(he)3’一(yi)端非(fei)翻(fan)譯區(qu)(3’-UTR).且5’一(yi)端無帽子(zi)結(jie)構(gou).3’一(yi)端無poly(A)尾(wei)巴(ba)。這(zhe)一(yi)大前體蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)以共翻(fan)譯和(he)(he)(he)后翻(fan)譯的形式在(zai)細(xi)胞蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)酶和(he)(he)(he)病(bing)毒特(te)異蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)酶作用(yong)下(xia).加工成(cheng)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)和(he)(he)(he)非(fei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai),其(qi)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)和(he)(he)(he)非(fei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)在(zai)病(bing)毒RNA上的編碼順序為(wei)Npro、c、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。NS2-3可被加工成(cheng)NS2、NS3(P80),除c、E0、E1和(he)(he)(he)E2為(wei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)外.其(qi)余(yu)均(jun)(jun)為(wei)非(fei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)。
目前已經定位的CSFV蛋白有5種,即Npro、c、Erns(E0)、E1和E2.它們均由CSFV的RNA-ORF5’一端所(suo)編碼。在結構蛋白中,最具有免疫防(fang)制研究價值的是(shi)EO和E2。
1.1c,是病(bing)毒的(de)衣殼蛋(dan)白,也稱p14,由病(bing)毒ORF中(zhong)的(de)Setl69~Ala267組成.是CSFV核衣殼蛋(dan)白其(qi)N端(duan)由CSFV非(fei)結構蛋(dan)白p23的(de)水解作(zuo)用(yong)產生,c端(duan)可能是由宿主細(xi)胞的(de)信(xin)號肽酶作(zuo)用(yong)所致。
1.2gp44/48,是病(bing)毒(du)的(de)(de)一種囊膜(mo)(mo)(mo)糖(tang)蛋(dan)白(bai).也(ye)稱(cheng)Erns.舊稱(cheng)E0。有9個可(ke)能的(de)(de)糖(tang)基(ji)化位點,去糖(tang)基(ji)的(de)(de)蛋(dan)白(bai)骨架分子量(liang)約26KDa,由(you)病(bing)毒(du)ORF中(zhong)Glu168-Ala494組成。在感染細胞中(zhong)gp44/48在內(nei)質網內(nei)積累(lei),并可(ke)存在于(yu)細胞膜(mo)(mo)(mo)表(biao)面或被分泌到胞外。在病(bing)毒(du)粒(li)子中(zhong)gp44/48以97KDa的(de)(de)同(tong)源二聚體形(xing)式存在于(yu)囊膜(mo)(mo)(mo)表(biao)面。由(you)于(yu)其分子內(nei)缺乏疏水的(de)(de)膜(mo)(mo)(mo)錨定區,與(yu)病(bing)毒(du)囊膜(mo)(mo)(mo)結(jie)合力弱.易從囊膜(mo)(mo)(mo)上(shang)游(you)離下來。gp44/48可(ke)誘(you)導(dao)產生(sheng)豬瘟的(de)(de)中(zhong)和抗體.免疫豬可(ke)誘(you)導(dao)產生(sheng)對(dui)致死(si)量(liang)CSFV的(de)(de)保護性(xing)免疫。由(you)于(yu)編碼(ma)gp44/48的(de)(de)核酸(suan)序列(lie)在屬(shu)內(nei)比編碼(ma)gp55的(de)(de)序列(lie)保守程度高,因(yin)此Erns可(ke)作為防治豬瘟的(de)(de)一種靶蛋(dan)白(bai)。
Erns具有RNase活(huo)性,作(zuo)用于(yu)(yu)單鏈的RNA.且(qie)對富含u的序列活(huo)性最高。4ng的Ems在(zai)體外即可將CSFV基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)RNA完全降(jiang)解。推(tui)測(ce)Ems沒有將其(qi)(qi)自(zi)身(shen)RNA降(jiang)解掉的原因(yin)(yin)(yin)(yin)可能是由(you)于(yu)(yu)空間(jian)上(shang)的隔(ge)離。在(zai)宿主細胞(bao)中,新合成的Erns在(zai)內(nei)質(zhi)網(wang)腔內(nei).而其(qi)(qi)基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)RNA則在(zai)胞(bao)漿中:在(zai)病毒(du)粒子中,定位于(yu)(yu)囊膜的Ems與其(qi)(qi)基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)RNA間(jian)隔(ge)著衣殼(ke)蛋白.因(yin)(yin)(yin)(yin)此Erns是不會降(jiang)解其(qi)(qi)自(zi)身(shen)RNA的。編碼Ems的基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)是瘟病毒(du)屬病毒(du)所特有的.黃病毒(du)科(ke)中其(qi)(qi)他病毒(du)基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)內(nei)無此基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin).推(tui)測(ce)該(gai)基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)是病毒(du)與宿主細胞(bao)的RNase基(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)重組(zu)得(de)到的。
1.3gp33,是(shi)CSFV囊膜糖(tang)蛋(dan)白(bai).也(ye)稱E1,去糖(tang)基(ji)(ji)(ji)的蛋(dan)白(bai)骨架分子(zi)量(liang)21.8KDa.由195個(ge)氨基(ji)(ji)(ji)酸殘基(ji)(ji)(ji)(ORF編碼的Leu495至(zhi)GlY68。組成,內有(you)3個(ge)可能的糖(tang)基(ji)(ji)(ji)化位(wei)(wei)點。其蛋(dan)白(bai)骨架中有(you)兩(liang)段(duan)疏(shu)水序列(Leu548~Pro579~Gly689)。在多(duo)聚蛋(dan)白(bai)轉(zhuan)位(wei)(wei)過程中,前一段(duan)是(shi)E1向內質網腔轉(zhuan)位(wei)(wei)的終止信號(hao),后一段(duan)則充當(dang)(dang)E2轉(zhuan)位(wei)(wei)的信號(hao)肽,除此之外,這(zhe)二段(duan)疏(shu)水區還(huan)充當(dang)(dang)E1的膜錨定(ding)位(wei)(wei)點。E1在病毒囊膜內.不能誘導(dao)豬產生(sheng)抗體(ti)。
1.4gp55.為CSFV的(de)(de)(de)另一(yi)囊膜糖蛋(dan)白,又(you)稱為E2,是病毒主(zhu)要(yao)的(de)(de)(de)抗原蛋(dan)白,也是三個(ge)病毒糖蛋(dan)白中(zhong)保(bao)守(shou)性最(zui)低.最(zui)易變異的(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)。gp55常(chang)以100kDa的(de)(de)(de)同源(yuan)二(er)聚體(ti)(ti)及(ji)(ji)與(yu)gp33形(xing)成75kDa的(de)(de)(de)異源(yuan)二(er)聚體(ti)(ti)形(xing)式存在于病毒粒(li)子(zi)及(ji)(ji)CSFV感染的(de)(de)(de)細胞表(biao)面。在體(ti)(ti)外(wai)gp55可誘(you)導產(chan)生病毒的(de)(de)(de)中(zhong)和抗體(ti)(ti),體(ti)(ti)內(nei)可誘(you)導產(chan)生抗CSFV的(de)(de)(de)攻擊的(de)(de)(de)抗體(ti)(ti)。Hulst用20μg昆曳細胞表(biao)達的(de)(de)(de)E2雙(shuang)相油包水(shui)乳劑免疫豬,能抵抗100LD50CSFVBrescia毒株強毒的(de)(de)(de)攻擊。gp55的(de)(de)(de)蛋(dan)白骨架由(you)370個(ge)氨(an)(an)(an)基(ji)酸(ORF編碼的(de)(de)(de)690-1060氨(an)(an)(an)基(ji)酸殘基(ji))組(zu)成.并以其(qi)c端的(de)(de)(de)40個(ge)疏(shu)水(shui)氨(an)(an)(an)基(ji)酸錨(mao)定在膜上(shang)。由(you)于糖基(ji)化程度(du)不同。E2的(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)量可為51-58kDa。E2分(fen)(fen)子(zi)內(nei)的(de)(de)(de)15個(ge)Cys殘基(ji)在屬內(nei)均保(bao)守(shou),其(qi)中(zhong)N端6個(ge)Cys殘基(ji)參與(yu)抗原結構(gou)域(yu)的(de)(de)(de)形(xing)成,c端9個(ge)Cys殘基(ji)則參與(yu)同源(yuan)、異源(yuan)二(er)聚體(ti)(ti)的(de)(de)(de)形(xing)成。
gp55的(de)(de)(de)抗(kang)原決定(ding)區在(zai)其N端(duan)部分(fen)(ORF編碼的(de)(de)(de)第690-866氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)),可分(fen)為2個(ge)獨立的(de)(de)(de)抗(kang)原結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)元(yuan),四個(ge)抗(kang)原結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)A.B.C,D。其中結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)A又可分(fen)為A.,A2,A3三個(ge)亞域(yu)。結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)B.c屬于一(yi)個(ge)結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)元(yuan).均為中和抗(kang)體(ti)的(de)(de)(de)結(jie)(jie)(jie)合位(wei)點.由ORF編碼的(de)(de)(de)690~800氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘基(ji)(ji)(ji)參與(yu)構(gou)(gou)(gou)成。Cys693與(yu)CYS7377形成的(de)(de)(de)二硫(liu)(liu)鍵對結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)B、c的(de)(de)(de)空間(jian)結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)至關重要。另一(yi)個(ge)結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)元(yuan)含A.D抗(kang)原結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)。A1、A2亞區定(ding)位(wei)于第795-851氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘基(ji)(ji)(ji),在(zai)種內保(bao)守A1是一(yi)個(ge)抗(kang)體(ti)的(de)(de)(de)中和位(wei)點。亞區A3定(ding)位(wei)于766-813氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘基(ji)(ji)(ji).而氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘基(ji)(ji)(ji)766-800則參與(yu)了結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)D的(de)(de)(de)構(gou)(gou)(gou)成。cys792~Cys856及Cys818~Cys828間(jian)的(de)(de)(de)二硫(liu)(liu)鍵對這(zhe)個(ge)結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)元(yuan)空問結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)的(de)(de)(de)形成是必需(xu)的(de)(de)(de)。連接這(zhe)兩個(ge)結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)元(yuan)的(de)(de)(de)是一(yi)段屬內保(bao)守的(de)(de)(de)疏水(shui)序(xu)列.推測這(zhe)段序(xu)列參與(yu)了病毒侵入細胞過程(cheng)中的(de)(de)(de)膜融合過程(cheng)。
1.5Npro,也稱p23,CSFV的(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)白(bai),是ORF編(bian)(bian)碼(ma)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)多聚蛋(dan)白(bai)N端(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第(di)一(yi)(yi)個(ge)(ge)蛋(dan)白(bai)質。Npro由168個(ge)(ge)氨(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)組成.具有蛋(dan)白(bai)質水解(jie)酶(mei)活(huo)性,能(neng)以自催化的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方式從(cong)正在(zai)(zai)翻譯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)多聚蛋(dan)白(bai)上斷(duan)(duan)裂下來,成為成熟的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)毒蛋(dan)白(bai)。序列比較(jiao)發(fa)現,編(bian)(bian)碼(ma)p23的(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因在(zai)(zai)瘟病(bing)毒屬中(zhong)(zhong)是較(jiao)為保守的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。它(ta)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)斷(duan)(duan)裂位點(dian)(dian)在(zai)(zai)Cysl68與其(qi)下游的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)毒核衣殼p14N端(duan)第(di)一(yi)(yi)個(ge)(ge)氨(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)ser。間。Npro的(de)(de)(de)(de)(de)(de)cys69和(he)His130可能(neng)位于其(qi)酶(mei)活(huo)性中(zhong)(zhong)心(xin).能(neng)水解(jie)斷(duan)(duan)裂Cys與Ala及Gly與Ser間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽鍵,斷(duan)(duan)列位點(dian)(dian)位于活(huo)性His殘(can)基(ji)(ji)(ji)(ji)下游38個(ge)(ge)氨(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji)(ji)處。Npro不(bu)(bu)參與CSFV的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構(gou)(gou)及非(fei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)加工(gong)過程.其(qi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)活(huo)性在(zai)(zai)cSFV增殖(zhi)過程中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)作用還不(bu)(bu)清(qing)楚。Rumenapf等人使用定(ding)點(dian)(dian)突(tu)變技術對參與Npro催化活(huo)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji)(ji)進行測定(ding).確定(ding)了其(qi)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)GIu22、His49和(he)Cys69是保持Npro蛋(dan)白(bai)酶(mei)活(huo)性所必(bi)需的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji)(ji),而His130并非(fei)必(bi)須。
實驗窒診斷
目(mu)前豬瘟流行常常表(biao)現無規律的(de)地區性散(san)發(fa).發(fa)病特(te)征不典型,以(yi)發(fa)熱、精神沉郁(yu)、食欲減退、咳嗽、共濟失(shi)調、結膜(mo)炎以(yi)及腹瀉、圍產期死亡、死胎(tai)、流產。中等毒力及強毒感染有以(yi)上這(zhe)些(xie)癥狀,并且在豬群中不分年齡(ling)快速傳(chuan)播。結合這(zhe)些(xie)臨床癥狀進行實驗室診斷(duan)是必要的(de)。
2.1病(bing)毒抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)豬瘟(wen)病(bing)毒抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)快(kuai)速檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)對(dui)于(yu)豬瘟(wen)的(de)(de)診斷具(ju)有特別重要的(de)(de)意(yi)義。目前快(kuai)速、敏(min)感(gan)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)方(fang)法(fa)(fa)(fa)是利(li)用免疫組化技(ji)術檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)扁(bian)桃(tao)體組織(zhi)。扁(bian)桃(tao)體中(zhong)(zhong)豬瘟(wen)病(bing)毒抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)可(ke)早(zao)(zao)在感(gan)染后2d檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)到(dao).淋巴結、脾臟以(yi)及胰腺均(jun)可(ke)作(zuo)為病(bing)毒早(zao)(zao)期檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)的(de)(de)組織(zhi)樣品(pin)。DelasMulas等及Narita等報道(dao)(dao)了(le)一(yi)種檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)豬瘟(wen)病(bing)毒抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)免疫組化方(fang)法(fa)(fa)(fa).即利(li)用針對(dui)E2糖蛋白的(de)(de)單克(ke)隆抗(kang)體檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)福爾馬林(lin)固(gu)定、石(shi)蠟包埋的(de)(de)組織(zhi)樣品(pin)的(de)(de)免疫組化方(fang)法(fa)(fa)(fa)。該方(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)優(you)點是能(neng)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)長期保(bao)存的(de)(de)樣品(pin),缺點是較費時.而(er)且福爾馬林(lin)固(gu)定后的(de)(de)組織(zhi)不(bu)能(neng)再進行病(bing)毒分離。利(li)用鏈酶(mei)一(yi)生物(wu)素一(yi)過氧化物(wu)酶(mei)(ABc)的(de)(de)免疫組化方(fang)法(fa)(fa)(fa)也能(neng)用于(yu)豬瘟(wen)病(bing)毒組織(zhi)切片上抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)。據報道(dao)(dao)流式細胞儀也可(ke)進行血樣中(zhong)(zhong)豬瘟(wen)病(bing)毒的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce),但其敏(min)感(gan)性較低。以(yi)豬瘟(wen)強毒感(gan)染仔豬,利(li)用抗(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)捕獲ELISA方(fang)法(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)其病(bing)毒血癥,結果表明該方(fang)法(fa)(fa)(fa)可(ke)用于(yu)豬群中(zhong)(zhong)流行病(bing)學的(de)(de)調查。但其敏(min)感(gan)性以(yi)及特異性均(jun)低于(yu)傳統的(de)(de)實驗室方(fang)法(fa)(fa)(fa)。
2.2感染性病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)檢測病(bing)(bing)毒(du)分(fen)離是目前(qian)體外檢測感染性豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du)最特(te)異的(de)(de)方法(fa)。已報道有幾種方法(fa)可以從組(zu)織、全血(xue)中(zhong)分(fen)離病(bing)(bing)毒(du),白(bai)(bai)(bai)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)是分(fen)離病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)最佳樣品。然而一(yi)些研(yan)究人員(yuan)發現(xian),白(bai)(bai)(bai)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)以及單核(he)(he)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)在動物(wu)(wu)感染后較(jiao)長時間才能感染病(bing)(bing)毒(du)。因(yin)此,對于豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)的(de)(de)早(zao)期診斷.全血(xue)或(huo)血(xue)漿可能比白(bai)(bai)(bai)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)更為(wei)(wei)敏感。最常用(yong)于豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du)分(fen)離的(de)(de)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)為(wei)(wei)豬(zhu)(zhu)腎細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(PKl5或(huo)SK6)或(huo)豬(zhu)(zhu)睪丸細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(sT)。日本建立了(le)一(yi)種豬(zhu)(zhu)腎由來(lai)的(de)(de)傳代細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)系(FS-L3).FS-L3細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)在不感染病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)情況下呈(cheng)大(da)園球狀(zhuang).數(shu)倍至數(shu)十(shi)倍于普(pu)通細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao).但一(yi)旦感染了(le)豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du),FS-L3細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)大(da)園球狀(zhuang)即消失.這(zhe)一(yi)特(te)性已被用(yong)作豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)中(zhong)和(he)試驗等各種生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)學特(te)性的(de)(de)測定。經研(yan)究發現(xian),產生(sheng)(sheng)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)病(bing)(bing)變的(de)(de)毒(du)株是因(yin)為(wei)(wei)它的(de)(de)遺(yi)傳基因(yin)發生(sheng)(sheng)了(le)變化。從5’末(mo)端(duan)的(de)(de)第(di)一(yi)個(ge)(ge)核(he)(he)苷(gan)(gan)酸到4764個(ge)(ge)核(he)(he)苷(gan)(gan)酸均已缺(que)失.其中(zhong)包括5’末(mo)端(duan)的(de)(de)非編(bian)碼(ma)區、自身(shen)蛋白(bai)(bai)(bai)分(fen)解酶、衣殼蛋白(bai)(bai)(bai)、糖蛋白(bai)(bai)(bai)(E0、E1、E2)、非結(jie)構蛋白(bai)(bai)(bai)NS-1、和(he)NS-2的(de)(de)基因(yin)均已缺(que)失。
2.3豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)基因組檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)已(yi)報道(dao)利用(yong)RT-PCR方(fang)(fang)法(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)RNA有數種(zhong)(zhong)程序。瘟(wen)病毒(du)屬特異的(de)(de)(de)(de)引物多選自基因組的(de)(de)(de)(de)5’端保守區.其最突(tu)出的(de)(de)(de)(de)優(you)點是其產(chan)物能(neng)用(yong)來直接測(ce)(ce)(ce)(ce)序,直接進行(xing)病毒(du)株的(de)(de)(de)(de)分型。一般來說(shuo)套式RT-PCR方(fang)(fang)法(fa)是檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)更敏感(gan)的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa),但(dan)其缺點是比(bi)較(jiao)費時.不適(shi)用(yong)于大(da)量樣品的(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)。McGoldrick等報道(dao)了一種(zhong)(zhong)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)的(de)(de)(de)(de)單管熒光RT-PCR方(fang)(fang)法(fa)。此方(fang)(fang)法(fa)可檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)出仔豬(zhu)血樣中(zhong)感(gan)染了中(zhong)等毒(du)力(li)或高等毒(du)力(li)的(de)(de)(de)(de)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du),其敏感(gan)性高于病毒(du)分離(li)方(fang)(fang)法(fa).并(bing)且(qie)簡(jian)化了試驗程序.減少了污(wu)染的(de)(de)(de)(de)風險(xian).還可進行(xing)大(da)量樣品的(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)。
2.4抗體(ti)檢測最常用的檢測豬(zhu)瘟(wen)病毒抗體(ti)的方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)多(duo)以病毒中和(he)試驗為基礎。目前已建立(li)數個(ge)特異的檢測血清抗體(ti)的ELlSA方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa).包括檢測針(zhen)對粗蛋(dan)白、特異結構(gou)蛋(dan)白如E2、Erns以及非結構(gou)蛋(dan)白NS3抗體(ti)的方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)。目前使用最廣泛(fan)的是CSFVE2ELISA,其敏感性與(yu)VNT相比(bi)為90%~99%.特異性為99%。Leforban等建立(li)了(le)一種ELISA方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa),能(neng)夠區分BVDV、BDV以及CSFV抗體(ti)。這個(ge)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)對于(yu)BVDV/BDV高流行地區(如荷蘭)csF的檢測非常有意義。ELISA特異性與(yu)敏感性的提高是目前面臨的最大的挑戰。
當前,豬(zhu)瘟仍是世界養(yang)豬(zhu)業(ye)的(de)(de)一(yi)大威脅(xie).1997-1999年(nian)期間在德國、荷蘭、西班牙和意大利(li)等(deng)國都曾多次暴發了(le)豬(zhu)瘟,在中國CSFV的(de)(de)持續性感染和疫苗(miao)保護效(xiao)力下(xia)降的(de)(de)現象也比較普遍(bian),這不(bu)僅給(gei)養(yang)豬(zhu)業(ye)造(zao)成了(le)嚴(yan)重的(de)(de)經濟損(sun)失(shi),而且也給(gei)豬(zhu)瘟防治政策的(de)(de)制定(ding)帶來了(le)一(yi)定(ding)的(de)(de)困難。不(bu)過(guo),相信隨(sui)著CSFV分子生(sheng)物學和檢測方法研究的(de)(de)進(jin)一(yi)步深入,這些問(wen)題都會得到最終解決。